移植肝通血前后組織中體液和細胞免疫標志物的變化.pdf

1、目的：1.觀察移植肝保存損傷的光鏡和電鏡結構。 2.觀察移植肝通血前后體液免疫標記和細胞亞群的變化。 3.乙型肝炎供肝與正常供肝之間保存損傷及體液、細胞免疫反應的差異。 4.觀察2例移植肝小葉中央型急性排斥中有無體液免疫反應參與。 方法： 1.標本 1.1第一部分收集收集2007年5月至2009年1月本院肝移植患者供肝通血前、后標本34例，共計68份標本。其中男性30例，女性4例，年齡26

2、～71歲，中位年齡47.5歲?；颊呷繛槁砸倚筒《靖窝?，其中伴有肝癌18例，急性肝功能衰竭1例，亞急性肝功能衰竭1例，慢性肝功能衰竭12例。供者34例，全部為男性，年齡25～30歲，腦外傷死亡。分為兩組，其中一組21例供肝為正常肝組織，無乙型肝炎病毒感染(簡稱NHB-D)；另一組13例有輕度慢性乙型肝炎(簡稱HB-D)。 1.2第二部分標本：供肝標本及對應的受者病肝標本來源均同第一部分，其中3例正常供肝通血前、后標本留備電鏡標

3、本。另選20例中度乙型慢性肝炎患者肝穿刺標本作為對照組。 1.3第三部分標本：兩例術后急性小葉中央型排斥肝穿刺組織，并以第一部分標本作為對照。 2.所有標本分別行HE，二步法免疫組化IgG、IgM、IgA、C3c、C4d、Clq和CD4、CD8、CD20、CD138、CD45ro、HBsAg和HBcAg染色；其中3例正常供肝通血前、后標本做電鏡常規(guī)制片。 3.觀察各組光鏡下改變；各種抗原在肝小葉血竇內皮和匯管區(qū)陽

4、性表達，并按陽性范圍分別計分：無為0分，<25％為1分，26～50％為2分，>50％為3分；透射電鏡下觀察超微結構改變。 4.免疫組化評分結果采用等級資料的非參數(shù)秩和檢驗，用SPSS13.0軟件完成。 結果： 第一部分： 1.所有供肝在血供開放前后存在不同程度的保存損傷(PI)，NHB-D中～重度PI占57，1％，HB-D中～重度PI占92.3％，差異有統(tǒng)計學意義(p=0.024)。 2.供肝通血

5、前，肝細胞內線粒體輕度腫脹，糖原分布均勻、致密，細胞核病變不明顯。通血后電鏡下可見肝細胞線粒體腫脹、變圓、呈球形、嵴斷裂、空泡增多；糖原顆粒稀疏分布；核膜不清楚、破壞、中斷，核異染色質集合、成塊、固縮，染色質濃縮成半月形或帽狀附于核膜；可見較多凋亡小體形成。 3.體液免疫反應標志物 IgG、IgM、IgA、C3c、C4d、Clq在NHB-D和HB-D組均有不同程度陽性表達。沉積物形態(tài)表現(xiàn)為沿肝竇內皮線狀或細顆粒狀沉積，

6、匯管區(qū)血管內皮細顆粒沉積，匯管區(qū)間質內為粗顆粒沉積。組間比較結果如下。 (1)NHB-D組通血后肝小葉IgM、IgA和匯管區(qū)的IgG、IgM、IgA、Clq明顯高于通血前p<0.05)。 (2)HB-D組通血后肝小葉和匯管區(qū)的IgG、IgM、IgA、C3c、Clq明顯高于通血前p<0.05)。 (3)NHB-D組和HB-D組進行比較，通血前兩組之間無明顯差異。通血后HB-D組的肝小葉Clq、C4d高于NHB-D組

7、p<0.05)。 4.細胞免疫標志物 供肝通血前后組織中浸潤細胞主要是CD45ro+T細胞，依次為CD8+T細胞、CD20+B細胞和CD138+漿細胞，CD4+T細胞少見，穿孔素陰性。 NHB-D組或HB-D組通血前后，以及兩組之間進行比較，各群細胞評分差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。 第二部分： 移植供肝通血前后光鏡、電鏡均可見較多球形蛋白滴散在于肝血竇內和肝細胞漿中，直徑1.5～2.5μM

8、，嗜伊紅色，免疫組化染色不同程度表達IgG、IgM、IgA、C3c陽性。 第三部分： 2例移植肝小葉中央型排斥肝組織內均可見免疫球蛋白沉積和補體激活現(xiàn)象。 結論： 1.移植肝通血后免疫球蛋白和補體表達較通血前明顯增加，但各種免疫細胞變化不明顯。 2.乙型肝炎供肝通血后產生的體液免疫反應較正常供肝強。 3.移植供肝通血前后血竇內及肝細胞漿中散在的球形蛋白滴，可能與移植肝保存液灌洗后殘留的血漿