大蒜素對糖尿病高同型半胱氨酸血癥大鼠腦功能損害的保護(hù)作用.pdf

1、目的：研究大蒜素對糖尿病高同型半胱氨酸血癥(HHcy)大鼠腦功能損害的防治作用，觀察大蒜素對同型半胱氨酸(Hcy)所致內(nèi)皮細(xì)胞損傷的拮抗作用，并探討其作用機(jī)制。 方法：1、雄性Wistar大鼠60只，普通鼠飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)l周后，隨機(jī)取10只作為正常對照組，剩余50只經(jīng)腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)制備糖尿病模型。經(jīng)檢測后從符合條件大鼠中隨機(jī)抽取40只分為空白對照組、模型對照組、西藥對照組、大蒜素治療組，每組lO只，加正常對照組10

2、只，共50只Wistar大鼠進(jìn)入實(shí)驗(yàn)，開始計(jì)-算病程。模型對照組、西藥對照組、大蒜素治療組均給予高蛋氨酸飼料，制備HHcy模型；正常對照組、空白對照組給予普通鼠飼料喂養(yǎng)。大蒜素治療組每日給大蒜素8mg/kg，生理鹽水稀釋后腹腔注射；西藥對照組給予葉酸0.45 mg/kg，維生素B62.7mg/kg，維生素B126.75μg/kg，研末后加入蒸餾水混勻，每次給予10mL/kg灌胃，連續(xù)用藥6周后，首先檢測腦干聽覺誘發(fā)電位(BAEP)、電迷

3、宮、經(jīng)顱多普勒超聲(TCD)，然后麻醉，腹腔靜脈取血，測定空腹血糖(FBG)、血生化、血Hcy濃度、空腹胰島素(FINS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)，并取腦組織測定單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，觀察海馬組織形態(tài)學(xué)，用免疫組化法測定海馬組織的分子生物學(xué)指標(biāo)。2、培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞，分成高Hcy組、大蒜素大劑量組、大蒜素中劑量組、大蒜素小劑量組、空白對照組5組，分別加不同的培養(yǎng)液，并于加藥后的12h、24h、36h取出上清液測內(nèi)皮素(ET)、

4、一氧化氮(NO)、SOD、MDA及乳酸脫氫酶(LDH)，并用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法(MTT)觀察細(xì)胞的存活率，觀察大蒜素對Hcy所致內(nèi)皮細(xì)胞損害的拮抗作用。 結(jié)果：1、大蒜素能縮短糖尿病HHcy大鼠BAEP的Ⅰ-Ⅲ波峰間潛伏期(IPL)和I-VIPL與空白對照組、模型對照組比較，差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。提示大蒜素具有顯著改善糖尿病HHcy大鼠的中樞傳導(dǎo)時(shí)間的作用。 2、電迷宮試驗(yàn)顯示，空白對照組

5、、模型對照組及西藥對照組大鼠存在學(xué)習(xí)記憶功能減退，而大蒜素治療組大鼠的學(xué)習(xí)、記憶成績均明顯優(yōu)于空白對照組和模型對照組(均P<0.05～0.01)，表明大蒜素可以改善糖尿病HHcy大鼠的學(xué)習(xí)、記憶能力，而西藥對照組無此作用。 3、大蒜素治療組大鼠與空白對照組、模型對照組比較，其腦動(dòng)脈血流速度減慢，腦血管阻力降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，但大蒜素治療組與正常對照組接近(P>0.05)，與西藥對照組比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

6、P>0.05)。提示大蒜素具有改善糖尿病HHcy大鼠腦血流的作用。 4、大蒜素治療組與空白對照組及模型對照組比較ISI明顯上升，IR顯著下降，組間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。大蒜素治療組治療后血糖水平明顯下降，與空白及模型對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)，且明顯優(yōu)于西藥對照組(P<0.05)。提示大蒜素具有提高糖尿病HHcy大鼠胰島素敏感性，改善其胰島素抵抗，明顯降低其血糖的作用。 5、大蒜

7、素治療組的血清Hcy水平明顯下降，與模型對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，與西藥對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。提示大蒜素能顯著降低糖尿病HHcy大鼠血清Hcy水平。 6、大蒜素治療組SOD活性明顯高于正常對照組(P<0.05)；大蒜素治療組MDA含量明顯低于空白對照組和模型對照組(P<0.05～0.01)，而與正常對照組接近(P>0.05)。提示大蒜素可降低糖尿病HHcy大鼠血清MDA水平、升高其SOD活

8、性。 7、大蒜素治療組大鼠腦組織的NE、DA含量較模型對照組顯著回降(P<0.05～0.01)，5-HT含量回升，且效果有優(yōu)于西藥對照組的趨勢。NOS和Ach E的蛋白表達(dá)較空白及模型對照組明顯上調(diào)(P<0.01)，并且效果優(yōu)于西藥對照組(P<0.05～0.01)。提示大蒜素可以調(diào)節(jié)糖尿病HHcy大鼠腦組織單胺類神經(jīng)遞質(zhì)代謝、調(diào)節(jié)其海馬組織NOS含量，提高其海馬組織Ach E活性。 8、大蒜素治療組大鼠海馬組織IGF-1

9、的表達(dá)比空白及模型對照組明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。提示大蒜素可上調(diào)糖尿病HHcy大鼠海馬組織神經(jīng)生長因子的表達(dá)。 9、與空白及模型對照組相比，大蒜素治療組大鼠Bax表達(dá)明顯下調(diào)，而Bc1-2/Bax比值顯著上調(diào)，海馬組織的神經(jīng)元計(jì)數(shù)也增多，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)，且該效果明顯優(yōu)于西藥對照組(P<0.01)。提示大蒜素能抑制糖尿病HHcy大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞的凋亡。 10、內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)發(fā)

10、現(xiàn)，大蒜素中劑量組和小劑量組的ET水平明顯低于模型對照組，NO水平則明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。提示大蒜素可促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞合成與釋放NO，降低ET水平。 11、內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，大蒜素中、小劑量組MDA濃度較模型對照組下降，SOD活性明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～0.01)；大蒜素中、小劑量組LDH水平均明顯低于模型對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)；大蒜素中劑量組、小劑量組光吸收A

11、值接近空白對照組，但較模型對照組明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。提示大蒜素可以降低內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液MDA水平，升高SOD活性，降低LDH水平，增加內(nèi)皮細(xì)胞的活性，拮抗。Hcy所致的內(nèi)皮細(xì)胞損傷。結(jié)論：大蒜素能明顯的降低血糖，降低血清Hcy水平，對高}-Icy造成的內(nèi)皮細(xì)胞損害-有保護(hù)作用，改善糖尿病HHcy大鼠的腦功能，其作用可能是通過改善胰島素敏感性、降低胰島素抵抗、改善腦血流、抗自由基、調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)、提高神經(jīng)生長因子表