不同應(yīng)力加載方式對成骨細(xì)胞線粒體膜電位的影響.pdf

1、【研究背景及目的】各類修復(fù)體承載基礎(chǔ)牙槽骨的退行性改變已成為現(xiàn)階段影響口腔修復(fù)治療效果的重要因素之一。研究和探討促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖和功能的生物治療方法是解決上訴問題的唯一途徑。線粒體膜電位△1lr與其功能狀態(tài)密切相關(guān)，在細(xì)胞不同的分化階段受到不同調(diào)節(jié)維持細(xì)胞功能。然而現(xiàn)在對于線粒體在成骨細(xì)胞受載后的功能變化尚不甚明了。本實驗旨在闡明不同加載方式對成骨細(xì)胞線粒體△1ψ，細(xì)胞增殖及分泌功能的影響；分析線粒體功能對力學(xué)刺激的響應(yīng)是否與細(xì)胞增殖和

2、分化狀態(tài)一致。 [實驗材料與方法]本實驗使用人類成骨細(xì)胞肉瘤來源MG63成骨細(xì)胞系，采用調(diào)節(jié)外環(huán)境的膠體滲透壓的方法對細(xì)胞進(jìn)行持續(xù)的均勻牽張，可以通過改變膠體滲透壓和加力時間來研究不同加力方式對成骨細(xì)胞線粒體功能的影響。在持續(xù)加力0.5h、4h和6h后檢測線粒體膜電位改變、細(xì)胞增殖指數(shù)變化和堿性磷酸酶ALP的表達(dá)，每時間點觀察4個實驗組及1個對照組。線粒體膜電位特異的熒光探針JC-1可以通過激光共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)定量研究△

3、ψ的變化。使用PI對75％乙醇固定細(xì)胞染色，用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期的改變。通過免疫組化技術(shù)觀察ALP在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況，所有結(jié)果利用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行分析。 【實驗結(jié)果】應(yīng)力刺激會不同程度地影響線粒體膜電位。在加力0.5小時組，各加力組的成骨細(xì)胞線粒體膜電位的功能均有顯著增強(qiáng)，與培養(yǎng)基對照組有顯著性差異；持續(xù)加力4小時后，300mOsM組與163mOsM組與對照組無明顯差異，其余加力值均可顯著提高△ψ：持續(xù)加力

4、6小時后，除240mOsM組△ψ有顯著升高外，其余各組無明顯差異。適當(dāng)?shù)膽?yīng)力刺激對于維持成骨細(xì)胞功能具有重要意義，特定應(yīng)力大小可以顯著地影響成骨細(xì)胞線粒體的功能，其中低滲277mOsM和240mOsM能夠顯著地增高△ψ。在持續(xù)加力4h組，277mOsM 240mOsM均可最大程度地促進(jìn)線粒體功能，在其它各組，有且僅有240mOsM的加力可以促進(jìn)線粒體△ψ達(dá)到相應(yīng)時間組的峰值。而該應(yīng)力大小也可以最大程度地促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖。 [