自體PRP對(duì)成骨細(xì)胞Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾’本學(xué)位論文在導(dǎo)師(或指導(dǎo)小組)的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名單位為河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。研究生簽名私新簽河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行

2、的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注等內(nèi)容外，文中不包括其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名：球謗導(dǎo)師簽矽日中文摘要自體P胛對(duì)成骨細(xì)胞I型膠原蛋白表達(dá)的影響摘要目的：富血小板血漿(plateletrichplasma，PRP)越來越受到人們的重視，它可以作為生長(zhǎng)因子的來源與骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(bonemarrowstromalstemcells，BMSCs)一起構(gòu)建種

3、植體周圍組織工程化骨。BMSCs進(jìn)入成骨分化后，可以作為種子細(xì)胞應(yīng)用于骨組織工程研究中。I型膠原蛋白是成骨細(xì)胞分泌的，是組成骨組織結(jié)構(gòu)和形成骨力學(xué)強(qiáng)度最基本的基質(zhì)蛋白。本研究采用體外實(shí)驗(yàn)，將由兔全血所制備的PRP作用于其自體BMSCs，探討自體PRP在不同的時(shí)間段對(duì)BMSCs增殖及分化能力的影響以及對(duì)成骨細(xì)胞I型膠原蛋白表達(dá)的影響，進(jìn)～步揭示PRP的作用機(jī)制，為臨床根據(jù)生理和病理的需要，對(duì)PRP選擇合理的應(yīng)用時(shí)間提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：@B

4、MSCs的培養(yǎng)：應(yīng)用全骨髓培養(yǎng)法取兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(，BMSCs)進(jìn)行原代培養(yǎng)，具體方法為：將23月齡新西蘭大白兔以戊巴比妥鈉經(jīng)耳緣靜脈麻醉，在腿部脛骨平臺(tái)處以16號(hào)骨髓穿刺針垂直骨面，旋轉(zhuǎn)進(jìn)入骨髓腔，抽取46ml骨髓接種于培養(yǎng)瓶，待細(xì)胞達(dá)到7080％貼壁融合后予以傳代，用倒置顯微鏡觀察原代及傳代細(xì)胞形態(tài)。②繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線：于110d每日將接種于24孔板內(nèi)的第三代BMSCs各取3孔，胰蛋白酶消化后置于倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線

5、。⑧PRP的制備：采用二次離心法分離兔全血制備PRP，儀器計(jì)數(shù)法獲得全血與PRP中的血小板數(shù)目。具體步驟為：麻醉實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后，分離頸動(dòng)脈，抽取全血約lOOml，第一次先以1100r／min速度室溫離心lOmin，吸取全部上清液及紅細(xì)胞液面下12mm液體，再以2200r／min的速度室溫離心lOmin，棄2／3上清液，所剩1／3液體即為PI沖。新鮮獲取的PRP以牛凝血酶激活后，立即加入到細(xì)胞培養(yǎng)系中。④成骨細(xì)胞的鑒定：取第3代生長(zhǎng)良好的BM