擬老年癡呆大鼠模型嗅覺(jué)系統(tǒng)相關(guān)改變的研究.pdf

1、阿爾滋海默病(Alzheimer'sdisease，AD)是一種原發(fā)退行性老年癡呆，其特征性病理改變有：腦組織內(nèi)出現(xiàn)大量老年斑(senile placques，SP)、神經(jīng)纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangle，NFT)、神經(jīng)元數(shù)量減少和顆?？张葑冃?granulovacuolar degeneration，GVD)等，AD的發(fā)病機(jī)理十分復(fù)雜，可能是多病因相互作用的結(jié)果。一些研究發(fā)現(xiàn)，嗅覺(jué)系統(tǒng)的功能障礙與AD尤其是早期A

2、D的發(fā)生有著密切的聯(lián)系。為了觀察AD嗅覺(jué)系統(tǒng)的病理改變?cè)诩膊“l(fā)生發(fā)展中的作用，建立一種理想的AD模型十分重要。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)大鼠進(jìn)行腦立體定位將Aβ通過(guò)微量進(jìn)樣器注入大鼠側(cè)腦室，導(dǎo)致大鼠被動(dòng)回避反射及水迷宮學(xué)習(xí)記憶障礙從而建立AD模型。通過(guò)HE染色觀察嗅上皮(olfactory epithelium，OE)、嗅球(olfactorybulb，OB)和海馬組織切片，觀察到AD模型組大鼠的嗅粘膜、嗅球和海馬較對(duì)照組均表現(xiàn)有神經(jīng)病理改變。

3、 在成功建立模型的基礎(chǔ)上對(duì)模型組和對(duì)照組大鼠的嗅粘膜、嗅球和海馬等嗅覺(jué)區(qū)域進(jìn)行膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron—specific enolase，NSE)以及嗅覺(jué)標(biāo)記蛋白(olfactory marker protein，OMP)的免疫組化相關(guān)檢測(cè)，并利用t檢驗(yàn)方法分析對(duì)照組和模型組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 為了深入研究基因水平上的變化本

4、文采用DNA微列陣技術(shù)對(duì)模型大鼠嗅球組織的基因表達(dá)譜的變化進(jìn)行了分析，以期從基因水平上分析嗅覺(jué)與老年癡呆的聯(lián)系。在得到的811個(gè)差異表達(dá)基因中進(jìn)行第一步初篩，挑選出23個(gè)表達(dá)差異明顯的基因，這些基因包括與神經(jīng)退行性疾病發(fā)病機(jī)制、細(xì)胞凋亡途徑、鈣離子信號(hào)通路等相關(guān)的基因。因?yàn)槔夏臧V呆疾病的病因雖然到目前為止并沒(méi)有明確，但是主要的分子生物學(xué)改變與細(xì)胞的凋亡、過(guò)氧化以及離子信號(hào)通路的改變均有密切的關(guān)系，這些在嗅球組織中發(fā)現(xiàn)的差異基因初步說(shuō)明了

5、嗅球和老年癡呆之間存在一定的聯(lián)系。 本文進(jìn)一步在所有挑選的差異表達(dá)基因中選擇六個(gè)與神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的改變、嗅覺(jué)特異性標(biāo)記、細(xì)胞凋亡以及鈣離子信號(hào)通路的調(diào)控相關(guān)的基因進(jìn)行半定量PCR檢測(cè)以驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄水平的變化。另外，在此基礎(chǔ)上采用WesternBlot的方法對(duì)這六個(gè)差異基因所對(duì)應(yīng)編碼的蛋白即GFAP、NSE、OMP、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(Calcineurin，CaN)和蛋白激酶C(proteinkinase C，PKC)進(jìn)一步驗(yàn)證蛋