NK及NKT細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)性矽肺大鼠模型中的研究.pdf

1、背景：矽肺是由于在生產(chǎn)或工作過(guò)程中長(zhǎng)期吸入大量含有二氧化硅含量較高的粉塵而引起的以肺組織纖維化為主的疾病。如果長(zhǎng)期處于高二氧化硅環(huán)境中，即使脫離這種環(huán)境矽肺依然會(huì)發(fā)病，即:有一個(gè)最少吸塵量；這已經(jīng)被Dale W Porter等證實(shí)[1-3]。矽肺在我國(guó)的發(fā)病率很高，成為危害勞動(dòng)者身體健康的最嚴(yán)重的一種職業(yè)病，而且病死率很高，因此在當(dāng)今和以后相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)對(duì)于矽肺的防治依然是職業(yè)病防治的重點(diǎn)[4]。矽肺的基本病變是特征性病灶矽結(jié)節(jié)的形成和

2、彌漫性間質(zhì)纖維化。至今其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，曾經(jīng)有脂質(zhì)過(guò)氧化學(xué)說(shuō)[5]、機(jī)械刺激學(xué)說(shuō)、細(xì)胞因子學(xué)說(shuō)[6]等，其免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制有待全面的研究。自然殺傷細(xì)胞（NK）是一種具有異質(zhì)性和多功能性的細(xì)胞群體，不同于T、B淋巴細(xì)胞，不僅可以直接殺傷靶細(xì)胞發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，又具有免疫屏障和免疫監(jiān)視的雙重作用，引起了學(xué)術(shù)界的極大關(guān)注。NKT細(xì)胞是一群介于NK細(xì)胞和T細(xì)胞間的細(xì)胞,它們同時(shí)表達(dá)多種NK細(xì)胞和T細(xì)胞的一些表面標(biāo)志分子。在生物體的多種免疫反應(yīng)中,如

3、抗微生物感染,自身免疫病的發(fā)生,移植物的存活和抗腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移,均發(fā)揮重要作用。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)矽肺大鼠外周血中NK及NKT細(xì)胞含量的變化規(guī)律，以探討NK及NKT細(xì)胞與矽肺關(guān)系，是矽肺發(fā)病免疫學(xué)機(jī)理的基礎(chǔ)研究之一。在實(shí)驗(yàn)早期我們發(fā)現(xiàn)，NK細(xì)胞分為明顯的兩群，即自然殺傷細(xì)胞（NK）亞群NKR-P1A dim和NKR-P1Abright，因此本文章將一并探討這種變化與矽肺的相關(guān)性及意義。
　　 目的：研究實(shí)驗(yàn)性矽肺大鼠在染

4、塵后的不同時(shí)間點(diǎn)外周血中自然殺傷細(xì)胞（NK）及自然殺傷T細(xì)胞（NKT）數(shù)量的變化，并探討NK、NKT細(xì)胞以及NK細(xì)胞亞群NKR-P1A dim和NKR-P1Abright與矽肺的相關(guān)性及臨床意義。
　　 方法：將48只健康雄性SD大鼠隨機(jī)分成模型組和對(duì)照組，每組24只。對(duì)模型組采用非暴露方式氣管內(nèi)一次染塵（注入1ml二氧化硅懸液（40mg/ml））建立大鼠矽肺模型，對(duì)照組采用相同方式氣管內(nèi)注入等量滅菌生理鹽水。分別與染塵后第1、

5、7、14、21、28、35天處分別處死模型組和對(duì)照組大鼠4只，采集外周血，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)大鼠外周血中NK（CD3-/CD161+）及NKT（CD3+/CD161+）細(xì)胞的百分率。將36只健康雄性SD大鼠隨機(jī)分成模型組和對(duì)照組，每組18只。對(duì)模型組采用非暴露方式氣管內(nèi)間隔染塵（注入2ml二氧化硅懸液（20mg/ml））期間間隔1周，建立大鼠矽肺模型，對(duì)照組采用相同方式氣管內(nèi)注入等量滅菌生理鹽水。分別與第二次染塵后第1、4、7、10、13

6、、16天處分別處死模型組和對(duì)照組大鼠3只，采集外周血，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)大鼠外周血中NK細(xì)胞亞群NKR-P1A dim和NKR-P1Abright的百分率。
　　 結(jié)果：矽肺大鼠外周血NK細(xì)胞的水平在實(shí)驗(yàn)早期（第1天）就開(kāi)始上升，高于對(duì)照組（P<0.05），第21天達(dá)到高峰；之后有所下降，但依然高于對(duì)照組。NKT細(xì)胞百分率在早期明顯下降，后期慢慢回升，但仍低于對(duì)照組；矽肺大鼠外周血中NK細(xì)胞亞群在對(duì)照組中以NKR-P1Abrigh

7、t為主，幾乎看不到NKR-P1A dim 亞群。在實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M早期NK細(xì)胞即出現(xiàn)明顯的兩個(gè)亞群。在第4天時(shí)NK細(xì)胞出現(xiàn)兩群NKR-P1A dim和NKR-P1Abright，之后NKR-P1A dim的比例開(kāi)始升高，在第10天時(shí)所占比例達(dá)到最大值，與對(duì)照組有明顯差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），然后其比例逐漸縮小，NK細(xì)胞主要以NKR-P1Abright為主。16天以后將看不到NKR-P1A dim 亞群。
　　 結(jié)論：石英