FK778預防大鼠慢性移植性腎病的系列實驗研究.pdf

1、在現(xiàn)有的醫(yī)學科學技術條件下，對于終末期腎衰竭病人，腎移植是最佳的治療手段。在過去的二十年中，盡管移植腎的短期存活率有了顯著提高，但移植腎的長期存活率仍無明顯改善。慢性移植性腎病(CAN)，或慢性排斥是臨床上導致移植腎長期腎失功的最重要原因之一。它是在腎移植中和腎移植后多種抗原依賴的和非抗原依賴的因素引起，多種細胞長期共同作用導致移植物受損的過程。慢性移植性腎病的臨床表現(xiàn)為蛋白尿的出現(xiàn)，血壓升高以及進行性的腎功能減退，組織學特點包括腎小管

2、萎縮，間質纖維化以及內膜增生的血管病變和移植性腎小球病變。 來氟米特和它的活性代謝物A77 1726為一類新的免疫抑制劑，它的主要作用為抑制嘧啶的再合成和抑制蛋白酪氨酸激酶的活性，從而抑制T細胞和B細胞的功能。在多個同種移植和異種移植模型中已顯示它能延長包括皮膚，心臟，腎臟和肝臟的移植物存活時間。初步的觀察表明該藥也能被病人很好的接受，在自身免疫性疾病的使用中己取得了令人鼓舞的效果。但由于A77 1726的半衰期長(15-1

3、8天)，從而導致來氟米特在移植病人的使用帶來困難。FK778為來氟米特的活性成份A77 1726衍生物，和A77 1726比較，半衰期縮短(6-45小時)，從而為其在腎移植病人中的使用帶來了可能，并且體內和體外的實驗表明，和來氟米特比較，F(xiàn)K778有一個相似的甚至更高的免疫抑制活性。 在本研究中，我們主要探討在大鼠慢排模型的不同階段給予低劑量FK778對大鼠慢性移植性腎病長期預后的影響，以全面了解FK778在慢排中的治療效果及相

4、關機理。本實驗包括三部分： 1．小劑量FK778持續(xù)治療對大鼠慢性移植性腎病長期預后的影響。 2．腎移植后早期短期使用小劑量FK778對大鼠慢性移植性。腎病長期預后的影響。 3．腎移植后延遲使用小劑量FK778對大鼠慢性移植性腎病長期預后的影響。 第一部分 小劑量FK778持續(xù)治療對大鼠慢性移植性 腎病長期預后的影響 材料與方法 采用國際上通用的慢排模型的的制作方法，F(xiàn)i

5、sher(F344)大鼠為供體，Lewis(LEW)大鼠為受體，行大鼠左腎原位移植，腎移植后切除受體右腎。從腎移植的第一天開始至第24周末每天使用FK778灌胃治療，劑量為5mg／kg／天。每四周測定大鼠24小時尿蛋白含量。第24周末收獲大鼠，分別行移植腎組織形態(tài)學檢查，免疫組化分析及TGF-β和PDGF-B mRNA表達分析。 結果 從第12周開始，和相同時間點的對照組比較，治療組大鼠24小時尿蛋白定量顯著減少

6、，直到第24周。根椐Banff97評分標準對移植腎評分后發(fā)現(xiàn)，接受持續(xù)治療的移植鼠和其對照組比較，評分顯著降低，同時持續(xù)治療組腎小球硬化程度也顯著降低。第24周時在所有大鼠移植腎均可發(fā)現(xiàn)CD5陽性的T淋巴細胞和CD68陽性的單核／巨噬細胞浸潤，T淋巴細胞在持續(xù)治療組和對照組比較，治療組浸潤細胞數顯著降低，同樣單核／巨噬細胞在持續(xù)治療組和對照組比較，治療組浸潤細胞數也顯著降低。使用實時定量RT-PCR，我們檢測了第24周末TGF-β和FD

7、GF-B mRNA在移植腎的表達,TGF-β mRNA的表達在治療組和對照組比較，雖然治療組較低，但兩組無顯著差異；FDGF-B mRNA的表達在治療組和對照組比較出現(xiàn)顯著差異。 結論 小劑量FK778持續(xù)治療能顯著改善大鼠慢性移植性腎病的長期預后。 第二部分腎移植后早期短期使用小劑量FK778對大鼠慢性移植性腎病長期預后的影響 材料與方法 采用國際上通用的慢排模型的的制作方法，F(xiàn)isher(F3

8、44)大鼠為供體，Lewis(LEW)大鼠為受體，行大鼠左腎原位移植，腎移植后切除受體右腎。治療組從腎移植后第一天開始至第十天，每天使用FK778灌胃治療，劑量為5mg/kg/天。治療十天后繼續(xù)觀察直至第24周末。每四周測定大鼠24小時尿蛋白含量。第24周末收獲大鼠，并分別行移植腎組織形態(tài)學檢查，免疫組化分析及TGF-B和PDGF-B mRNA表達的分析。 結果 隨著觀察時間的延長，治療組24小時尿蛋白定量和同一時間點的

9、對照組比較，無顯著差異，直至第24周。根椐Banff97評分標準對移植腎評分后發(fā)現(xiàn)，接受早期短期治療的移植鼠和其對照組比較，評分無明顯差異，同樣腎小球硬化程度在兩組之間也無顯著差異。在第24周時在所有大鼠移植腎組織均可發(fā)現(xiàn)CD5陽性的T淋巴細胞和CD68陽性的單核/巨噬細胞浸潤。T淋巴細胞浸潤數在治療組和對照組比較無顯著差別，單核/巨噬細胞在治療組和對照組比較也無明顯差別。使用實時定量RT-PCR，我們檢測了第24周末治療組和對照組移植

10、腎組織TGF-β和FDGF-B mRNA的表達，治療組和對照組比較，兩個生長因子的mRNA表達均無顯著差異。 結論 小劑量FK778在腎移植后早期短期治療不能有效改善大鼠慢性移植性腎病的長期預后。 第三部分腎移植后延遲使用小劑量FK778對大鼠 慢性移植性腎病長期預后的影響 材料與方法 采用國際上通用的慢排模型的的制作方法，F(xiàn)isher(F344)大鼠為供體，Lewis(LEW)大鼠為受體

11、，行大鼠左腎原位移植，腎移植后切除受體右腎。從腎移植后第16周開始至第24周末每天使用FK778灌胃治療，劑量為5mg/kg天。每四周測大鼠24小時尿蛋白含量。第24周末收獲大鼠，并分別行移植腎組織形態(tài)學檢查，免疫組化分析及TGF-β和PDGF-BmRNA表達的分析。 結果 治療組大鼠第16周開始使用FK778治療后，經過一段時間，和相同時間點的對照組比較，24小時尿蛋白定量開始下降，到第24周時顯著減少。根椐Ban

12、ff 97評分標準對移植腎評分后發(fā)現(xiàn)，接受延遲治療的移植鼠和其對照組比較，評分顯著降低，同時延遲治療組腎小球硬化程度也顯著降低。在第24周時在所有大鼠移植。腎均可發(fā)現(xiàn)CD5陽性的T淋巴細胞和CD68陽性的單核／巨噬細胞浸潤，T淋巴細胞在接受FK778延遲治療組和對照組比較，治療組浸潤細胞數顯著降低，同樣單核／巨噬細胞在接受FK778延遲治療組和對照組比較，治療組浸潤細胞數也顯著降低。使用實時定量RT-PCR，我們檢測了第24周末TGF-