維生素K2抑制人肝癌細(xì)胞株HuH-7增殖及下調(diào)FGFR3表達(dá).pdf

1、研究目的： 以先前基因芯片結(jié)果為基礎(chǔ)，確證維生素K2對(duì)人肝癌細(xì)胞株HuH-7增殖的抑制作用及其對(duì)成纖維細(xì)胞生長因子受體3(FGFR3)的下調(diào)作用，力圖為維生素K2的臨床應(yīng)用及人類肝癌靶向治療提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 研究方法： (1)、以MTT法檢測(cè)維生素K2對(duì)HuH-7細(xì)胞增殖的抑制作用； (2)、以半定量RT-PCR法檢測(cè)0、10、30μM維生素K2干預(yù)后HuH-7細(xì)胞中FGFR3和FGFR1的mRNA表達(dá)

2、； (3)、以實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)0、10、30μM維生素K2干預(yù)后HuH-7細(xì)胞中FGFR3和FGFR1的mRNA表達(dá)； (4)、以Western-blot法檢測(cè)不同濃度維生素K2處理后的HuH-7細(xì)胞中FGFR3蛋白表達(dá)。 研究結(jié)果： (1)、維生素K2對(duì)HuH-7細(xì)胞生長有抑制作用。10、30μM維生素K2干預(yù)組對(duì)HuH-7細(xì)胞的抑制率與無藥對(duì)照組比較，72、96h有顯著性差異(P<0.01)，0.

3、01、0.1、1μM維生素K2干預(yù)組對(duì)HuH-7細(xì)胞的抑制率與無藥對(duì)照組比較，48、72及96 h均無顯著性差異(P>0.05)；30μM維生素K2抑制HuH-7細(xì)胞增殖呈時(shí)間依賴性。 (2)、RT-PCR示96 h后10、30 μM維生素K2干預(yù)組能呈劑量依賴性抑制HuH-7細(xì)胞中FGFR3 mRNA表達(dá)，而未明顯抑制HuH-7細(xì)胞中FGFR1 mRNA表達(dá)； (3)、實(shí)時(shí)定量PCR示96h后10、30μM的維生素K2

4、干預(yù)組中FGFR3 mRNA表達(dá)分別為無藥對(duì)照組的0.692±0.087倍(p=0.0124，<0.05)和0.385±0.053倍(p<0.0001)，均有顯著性差異，10、30 μM的維生素K2干預(yù)組之間亦存在顯著性差異(p=0.0236，<0.05)；96 h后10、30 μM的維生素K2干預(yù)組中FGFR1 mRNA表達(dá)分別為無藥對(duì)照組的0.938±0.051倍(p=0.2921，>0.05)和0.933±0.096倍(p=0.5

5、230，>0.05)，均無顯著性差異；10、30μM的維生素K2干預(yù)組之間亦無顯著性差異(p=0.9678，>0.05)； (4)、Western-blot法檢測(cè)結(jié)果示96h后10、30μM的維生素K2干預(yù)組中FGFR3的蛋白表達(dá)較無藥對(duì)照組及10、30μM維生素K2干預(yù)組之間(125 KDa，135 KDa)均存在顯著性差異(p<0.01)。 研究結(jié)論： (1)、維生素K2能呈時(shí)間和劑量依賴性抑制HuH-7細(xì)胞增殖；