構(gòu)建去細(xì)胞牛頸靜脈內(nèi)皮化實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究去細(xì)胞加光氧化交聯(lián)處理后牛頸靜脈血管片表面改性方法，增加組織工程血管材料內(nèi)皮細(xì)胞的黏附生長(zhǎng)。
　　 方法：選取新鮮合適的牛頸靜脈，采用多步驟去垢劑-酶消化法脫細(xì)胞和光氧化交聯(lián)，經(jīng)處理后的牛頸靜脈脫細(xì)胞基質(zhì)是比較理想的組織工程血管支架。應(yīng)用纖維連接蛋白(Fibronectin,Fn)，Ⅳ型膠原(Collagen,ColⅣ)，明膠為單獨(dú)預(yù)襯成分，纖維連接蛋白＋明膠，纖維連接蛋白＋Ⅳ型膠原＋明膠為混合預(yù)襯成分，設(shè)置磷酸緩沖液

2、體組(PBS)預(yù)襯為對(duì)照組，每組成分均以30μ1的劑量采用物理包裹法，預(yù)襯去細(xì)胞牛頸靜脈血管片54片（裁剪每片面積約1.6cm2）。每片種植人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株細(xì)胞(CRL-2480)5×105，靜態(tài)培養(yǎng)7天，取1，4，7天標(biāo)本消化血管片表面細(xì)胞記數(shù)，標(biāo)本切片HE染色，掃描電鏡和透射電鏡檢測(cè)，比較各處理組血管片表面細(xì)胞黏附數(shù)目，結(jié)合程度，對(duì)比不同預(yù)處理方法對(duì)增強(qiáng)細(xì)胞黏附性和促進(jìn)生長(zhǎng)情況的影響，探索最佳組織工程血管改性技術(shù)。
　　

3、結(jié)果：(1)細(xì)胞記數(shù)：細(xì)胞培養(yǎng)第1天，預(yù)襯組細(xì)胞數(shù)目多于對(duì)照組(p＜0.05)，預(yù)襯處理組間無明顯差別。第4-7天，混合預(yù)襯組與單一預(yù)襯組間有差別(p＜0.05)，混合預(yù)襯組內(nèi)無差別(p＞0.05)。(2)標(biāo)本石蠟包埋后切片HE染色結(jié)果：第1天各組血管片表面細(xì)胞排列密集，紊亂，細(xì)胞核有堆積，部分呈雙層排布；第4天，對(duì)照組血管表面細(xì)胞疏松，有成片分布；預(yù)襯組細(xì)胞連接成片，呈單層排布。第7天，對(duì)照組和單獨(dú)預(yù)襯組細(xì)胞都較少，混合預(yù)襯組細(xì)胞鋪連

4、成片，與下方纖維結(jié)構(gòu)有連接，未出現(xiàn)表皮脫落。(3)取7天標(biāo)本掃描電鏡顯示：PBS組血管片表面細(xì)胞稀疏，細(xì)胞間無橋接，與下方的纖維結(jié)構(gòu)聯(lián)結(jié)不明顯?；旌项A(yù)襯組鋪連成片，細(xì)胞間長(zhǎng)梭形有橋接和突起，與去細(xì)胞的血管片纖維之間形成連接。(4)透射電鏡：可觀察到表面生長(zhǎng)內(nèi)皮細(xì)胞與下方纖維成分有空白帶存在。
　　 結(jié)論：去細(xì)胞加光氧化處理后的牛頸靜脈血管片可生長(zhǎng)內(nèi)皮細(xì)胞。經(jīng)過Fn，ColⅣ，明膠單獨(dú)預(yù)襯處理的血管片表面，可增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞黏附和貼壁