自體內(nèi)皮祖細胞移植防治經(jīng)頸靜脈門腔分流道再狹窄的實驗研究.pdf

1、目的：探索家豬外周血來源的內(nèi)皮祖細胞的分離、培養(yǎng)、鑒定的方法以及內(nèi)皮祖細胞種植支架體外構建條件。
　　 材料及方法：用密度梯度離心法從普通幼年家豬外周血單個核細胞（monocytes，MNs），通過貼壁篩選得到內(nèi)皮祖細胞（EPCs），從細胞形態(tài)、免疫組化及熒光染色等方面鑒定內(nèi)皮祖細胞。采用冷沉淀法分離外周血中纖維蛋白原。將鎳鈦合金金屬支架分別置入含有及不含有纖維蛋白原和凝血酶的培養(yǎng)液中（內(nèi)皮祖細胞濃度為2.5×106/mL）共孵

2、育。觀察支架的形態(tài)，并將從支架表面沈脫下來的細胞進行計數(shù)，并繼續(xù)培養(yǎng)鑒定。
　　 結果：普通幼年家豬外周血分離得到的單個核細胞MNs經(jīng)體外培養(yǎng)呈內(nèi)皮細胞樣形態(tài)，光鏡下從類圓形-多角形-梭形演變，表達內(nèi)皮祖細胞的表面標志物CD31、CD34、VEGFR-2、vWF等，具有內(nèi)吞乙酰化低密度脂蛋白（acLDL）和結合荊豆凝集素（UEA-1）等內(nèi)皮祖細胞的功能特性。鎳鈦合金支架在含纖維蛋白原的培養(yǎng)液中共孵育后呈管狀，表面覆蓋有一層生物膜

3、。膜狀物沈脫后細胞計數(shù)顯示，加纖維蛋白原組細胞數(shù)量明顯增多（5.0（士1.3）×105個vs4（士1.5）×103）。繼續(xù)培養(yǎng)，這些細胞具有內(nèi)皮祖細胞的功能特性。
　　 結論：普通幼年家豬外周血中存在具有增殖分化能力的內(nèi)皮祖細胞（EPCs），可以通過密度梯度離心法分離得到，經(jīng)體外培養(yǎng)，轉化為內(nèi)皮細胞。用纖維蛋白原作為黏附劑，可以將內(nèi)皮祖細胞種植到金屬支架絲表面，并保持內(nèi)皮祖細胞的功能特性。
　　 目的：評價內(nèi)皮祖細胞種植

4、支架在經(jīng)頸靜脈肝內(nèi)門體靜脈分流術（TIPS）家豬動物模型中減少分流道再狹窄的療效。
　　 材料及方法：15頭家豬行TIPS介入手術，隨機分為EPC種植支架組9例（實驗組），裸支架組6例（對照組）。TIPS術后14天行直接門靜脈造影，然后處死動物，作病理分析及免疫組化檢查，記錄分流道狹窄及阻塞情況，并用圖像處理軟件計算TIPS分流道假性內(nèi)膜厚度及面積，結果行統(tǒng)計學分析。
　　 結果：15例TIPS手術均獲成功。實驗組分流道

5、通暢5例，狹窄2例（狹窄率50％，70％），阻塞2例（共9例）。對照組狹窄1例（80％），阻塞5例（共6例）。兩組通暢率有顯著差異（56％vs0％，F(xiàn)isher精確概率法p=0.03）。實驗組假性內(nèi)膜增生的厚度顯著小于對照組。免疫組化顯示實驗組中通暢的分流道有完整的內(nèi)皮形成。再狹窄分流道的假性內(nèi)膜主要由膠原纖維組成，而通暢分流道的假性內(nèi)膜主要由細胞成分組成。
　　 結論：內(nèi)皮祖細胞種植支架植入促進了家豬模型TIPS分流道內(nèi)皮化形