促紅細(xì)胞生成素對(duì)多發(fā)性骨髓瘤小鼠鐵調(diào)蛋白hepcidin和腫瘤增殖的影響及機(jī)理.pdf

1、[研究背景]
　　 慢性病貧血(ACD)是一種伴發(fā)于急慢性炎癥、感染或惡性腫瘤的臨床貧血綜合征，鐵代謝障礙被認(rèn)為是ACD發(fā)病最重要的機(jī)理。新發(fā)現(xiàn)的小分子肽鐵調(diào)蛋白hepcidin被認(rèn)為是鐵代謝的中心調(diào)節(jié)因子，它一方面與膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白FPN結(jié)合，導(dǎo)致鐵輸出減少；另一方面可抑制腸道鐵吸收蛋白如DMT1的表達(dá)，是造成ACD鐵代謝異常的直接原因。目前尚缺乏腫瘤性ACD模型中對(duì)hepcidin的研究。使用促紅細(xì)胞生成素(EPO)是治療ACD

2、的主要手段之一，并且EPO被證實(shí)可在體外或體內(nèi)炎癥狀態(tài)下抑制hepcidin表達(dá)，糾正ACD，但具體機(jī)制不清。而EPO在糾正腫瘤性貧血的同時(shí)存在刺激腫瘤增殖的風(fēng)險(xiǎn)，但對(duì)多發(fā)性骨髓瘤的影響尚無(wú)定論。
　　 [研究目的]
　　 1.了解多發(fā)性骨髓瘤的長(zhǎng)期荷瘤小鼠模型是否出現(xiàn)ACD。
　　 2.了解多發(fā)性骨髓瘤荷瘤小鼠肝臟hepcidin水平是否升高，其作用靶點(diǎn)DMT1及FPN是否有相應(yīng)的改變。
　　 3.探討

3、EPO是否對(duì)多發(fā)性骨髓瘤荷瘤小鼠的hepcidin表達(dá)有抑制作用，其作用機(jī)理如何。
　　 4.了解EPO是否可刺激多發(fā)性骨髓瘤的腫瘤生長(zhǎng)。
　　 [研究方法]
　　 1.用多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株注射于小鼠皮下，建立長(zhǎng)期荷瘤模型，檢測(cè)小鼠貧血及鐵代謝指標(biāo)。
　　 2.用RealtimePCR半定量法檢測(cè)荷瘤小鼠與正常小鼠肝臟hepcidin、肝臟及十二指腸DMT1及FPN的mRNA表達(dá)。
　　 3.采用

4、短期EPO、長(zhǎng)期EPO及白細(xì)胞介素6(IL-6)抗體干預(yù)荷瘤小鼠，對(duì)比其與無(wú)干預(yù)荷瘤小鼠肝臟hepcidin、十二指腸DMT1及FPNmRNA表達(dá)的變化，同時(shí)檢測(cè)hepcidin的調(diào)節(jié)因子IL-6、BMP4、TMPRSS6及GDF-15表達(dá)情況，尋找EPO的作用機(jī)理。
　　 4.流式細(xì)胞儀測(cè)量多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株及患者原代腫瘤細(xì)胞中EPOR表達(dá)情況。
　　 5.體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞株，用CCK-8法檢測(cè)EPO對(duì)細(xì)胞增殖的影響

5、。
　　 6.采用骨髓瘤荷瘤模型，觀察EPO對(duì)腫瘤增殖的作用。
　　 [結(jié)果]
　　 1.小鼠荷瘤6周后出現(xiàn)貧血、血清鐵及轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度下降，骨髓涂片鐵染色提示紅細(xì)胞內(nèi)鐵減少、吞噬細(xì)胞內(nèi)鐵增多。
　　 2.骨髓瘤荷瘤小鼠肝臟hepcidinmRNA高于正常同齡小鼠，其腸道DMT1、FPN及肝臟FPNmRNA水平明顯降低，肝臟DMT1mRNA無(wú)變化。
　　 3.采用短期EPO、長(zhǎng)期EPO或IL-6抗

6、體均可明顯抑制肝臟hepcidinmRNA水平，但長(zhǎng)期EPO及IL-6抗體可升高腸道DMT1及FPNmRNA水平，僅長(zhǎng)期EPO可升高肝臟FPNmRNA。
　　 4.EPO治療后肝臟IL-6mRNA水平降低，短期EPO降低了肝臟BMP4mRNA水平，但長(zhǎng)期EPO則對(duì)其無(wú)影響。
　　 5.骨髓瘤細(xì)胞株及原代患者骨髓瘤細(xì)胞可表達(dá)EPOR；但EPO不能在體外刺激骨髓瘤細(xì)胞增殖，也對(duì)骨髓瘤荷瘤小鼠的瘤塊無(wú)刺激生長(zhǎng)的作用。
　

7、　 [結(jié)論]
　　 1.多發(fā)性骨髓瘤長(zhǎng)期荷瘤模型是一種腫瘤-ACD模型。
　　 2.多發(fā)性骨髓瘤荷瘤小鼠肝臟hepcidinmRNA升高。
　　 3.EPO可明顯抑制肝臟hepcidinmRNA水平。
　　 4.短期EPO可能通過(guò)降低IL-6水平、降低血清鐵及BMP4水平來(lái)抑制hepcidin；長(zhǎng)期EPO則可能通過(guò)抑制IL6水平平達(dá)到降低hepcidin的作用。
　　 5.骨髓瘤細(xì)胞可表達(dá)EPO