蛇床子藥材質(zhì)量評價的現(xiàn)代色譜方法學(xué)研究.pdf

1、蛇床子為傘形科蛇床屬植物蛇床Cnidium monnieri(L．)Cusson的果實，為中醫(yī)臨床常用中藥之一，具有濕腎壯陽，燥濕，殺蟲之功效。蛇床子廣泛分布于我國大部分地區(qū)，因地理位置和生態(tài)環(huán)境的不同，其種內(nèi)的化學(xué)成分發(fā)生了較大的變異。目前普遍認(rèn)為香豆素類化合物是蛇床子的主要活性成分，為了綜合開發(fā)利用藥用植物資源，尋找蛇床子的新藥用資源，本課題以中藥蛇床子為研究對象，建立了現(xiàn)代色譜對其進(jìn)行香豆素成分表征的方法。采用反相高效液相色譜法、

2、細(xì)徑柱高效液相色譜法、β-環(huán)糊精修飾膠束電動毛細(xì)管色譜法、加壓毛細(xì)管電色譜法為研究技術(shù)，對蛇床子藥材中的香豆素類化合物進(jìn)行了指紋圖譜和質(zhì)量控制的表征，研究成果可為蛇床子藥材質(zhì)量控制的現(xiàn)代化研究提供研究方法的模板和技術(shù)平臺。 1．RP-HPLC測定蛇床子藥材中香豆素成分 采用反相高效液相色譜(RP-HPLC)法對12批不同來源蛇床子藥材特征成分進(jìn)行分離分析，建立評價其質(zhì)量的特征成分譜。采用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱Diamon

3、silTM C18色譜柱(150mm×4.6mm，5μm)，流動相為乙腈-10mM醋酸銨水溶液(用醋酸調(diào)節(jié)pH至4.0)(體積比為50：50)；紫外檢測波長320 nm。以安定為內(nèi)標(biāo)，佛手柑內(nèi)酯、歐前胡素、2’-乙酰白芷素、歐山芹素、O-乙酰哥倫比亞內(nèi)酯的回歸方程分別為Y=0.0279X-0.0203，Y=0.0197X+0.041，Y=0.0251X+0.032，Y=0.0368X+0.0252，Y=0.0325X+0.0228，線性

4、范圍4μg/mL～100μg/mL；蛇床子素的回歸方程Y=0.0472X-0.0539，線性范圍10μg/mL～300μg/mL；平均回收率和RSD分別為98.1％、96.2％、96.4％、101.9％、102.4％、98.4％和4.58％、5.73％、3.58％、4.89％、5.85％、4.51％。本方法簡便快速，回收率及重現(xiàn)性良好，適用于蛇床子藥材中香豆素類化合物的優(yōu)化分離及佛手柑內(nèi)酯、歐前胡素、蛇床子素、2’-乙酰白芷素、歐山芹素

5、和O-乙酰哥倫比亞內(nèi)酯的定量分析，并為蛇床子藥材的質(zhì)量控制與道地性研究提供了簡便的方法。 2．細(xì)徑柱RP-HPLC測定蛇床子藥材中香豆素成分 在前一章的基礎(chǔ)之上，將常規(guī)色譜柱改為細(xì)內(nèi)徑色譜柱，建立了一種快速，簡便，重現(xiàn)性高的細(xì)徑柱高效液相色譜方法，同時測定12批不同來源的蛇床子藥材中香豆素類化合物佛手柑內(nèi)酯、歐前胡素、蛇床子素、2’-乙酰白芷素、歐山芹素和O-乙酰哥倫比亞內(nèi)酯的含量。采用Phenomenex()C18色譜

6、柱(150 nm×2.1 mm，5μm)；流動相：乙腈-10mM醋酸銨水溶液(用醋酸調(diào)節(jié)pH至4.0)(體積比為50：50)；流速0.3mL/min；紫外檢測波長320nm；進(jìn)樣量為20μL。實驗結(jié)果表明，方法靈敏準(zhǔn)確，重現(xiàn)性高，適于含量測定。 3．膠束電動毛細(xì)管色譜測定蛇床子藥材中香豆素類成分 建立了β-環(huán)糊精修飾膠束電動毛細(xì)管色譜分離和測定蛇床子藥材中香豆素類化合物的方法。分別對內(nèi)標(biāo)選擇、pH、緩沖液濃度、緩沖液的組

7、成及濃度等影響因素做了系統(tǒng)的研究。使用未涂布熔融石英毛細(xì)管柱50.2cmx75μm i．d．，有效長度40cm，運行緩沖液為40 mM硼砂緩沖液-25mM SDS-10mM羥丙基環(huán)糊精(pH9.5)和20％的甲醇，柱溫為25℃，運行電壓為30 kV(+)→(-)，壓力進(jìn)樣1psi×5s，檢測波長為210nm。同時測定了不同購買地蛇床子藥材中六種香豆素成分佛手柑內(nèi)酯、歐前胡素、蛇床子素、2’-乙酰白芷素、歐山芹素和O-乙酰哥倫比亞內(nèi)酯的含

8、量。此結(jié)果對蛇床子藥材的分離分析在微分離領(lǐng)域的應(yīng)用具有一定提示作用，為生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制提供了有利依據(jù)。 4．加壓毛細(xì)管電色譜分離測定蛇床子藥材中香豆素成分 建立加壓毛細(xì)管電色譜(pCEC)對蛇床子藥材進(jìn)行質(zhì)量控制的微柱分析方法。首先，基于加壓毛細(xì)管電色譜儀的分離核心為毛細(xì)管色譜柱，對常規(guī)兩端燒結(jié)塞子的填充柱進(jìn)行了改進(jìn)，采用進(jìn)口端為開管柱而出口端為整體柱塞子的毛細(xì)管色譜填充柱，并對其制備法的重復(fù)性與可行性進(jìn)行了探討和研究

9、。其次，在采用自制新型的毛細(xì)管色譜柱上對蛇床子中香豆素類成分進(jìn)行了分離和包括乙腈比例，緩沖液離子強(qiáng)度，pH值和運行電壓的條件優(yōu)化，優(yōu)化后的電色譜條件可在15min之內(nèi)分離蛇床子藥材中六種香豆素類化合物(蛇床子素、佛手柑內(nèi)酯、歐前胡素、歐山芹素、2’-乙酰白芷素、O-哥倫比亞內(nèi)酯)并對方法的線性、精密度、穩(wěn)定性、加樣回收率等進(jìn)行了較為全面的考察。實驗結(jié)果表明，方法靈敏準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，適于含量測定。該結(jié)果對加壓毛細(xì)管電色譜法在中藥分離分析中