吡咯烷二硫代氨基甲酸酯及吡格列酮保護(hù)糖尿病大鼠腎臟機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 本研究旨在探討高糖高脂喂養(yǎng)結(jié)合小劑量STZ誘導(dǎo)的2型糖尿病大鼠腎臟組織NF-κB p65、MCP-1表達(dá)與腎臟組織結(jié)構(gòu)和功能改變之間的關(guān)系；并通過觀察吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)、吡格列酮(PIO)以及PDTC聯(lián)合PIO藥物干預(yù)對(duì)2型糖尿病大鼠腎組織核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)p65及單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)表達(dá)的影響，以探討上述兩種藥物對(duì)2型糖尿病腎臟保護(hù)的作用機(jī)制。
　　 方法：

2、>　　 SPF級(jí)SD雄性大鼠50只，隨機(jī)分為2組：正常對(duì)照組(NC組，n=10只)，給予普通飼料喂養(yǎng)；模型組45只，給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)。4周后，一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)(30 mg·kg-1)制備2型糖尿病大鼠模型。72h后，尾靜脈采血測(cè)兩次隨機(jī)血糖＞16.7mmo1·L-1，確定40只為造模成功大鼠。成模大鼠繼續(xù)給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)，并隨機(jī)分為4組：糖尿病對(duì)照組(DM組，n=10只)、PDTC治療組(PDTC組，n=10

3、只，100mg·kg-1·d-1)、吡格列酮治療組(PIO組，n=10只，10 mg·kg-1·d-1)和PDTC聯(lián)合PIO治療組(PDTC+PIO組，n=10只，分別100mg·kg-1·d-1與10mg·kg-1·d-1)，上述藥物均溶于蒸餾水等量灌胃，NC組和DM組給予等量蒸餾水灌胃。治療8周后處死大鼠。處死前一日收集24h尿，檢測(cè)尿24h蛋白(24hUP)定量；下腔靜脈取血檢測(cè)空腹血糖(FPG)、膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)

4、、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、丙二醛(MDA)、血清超氧化物歧化酶(SOD)活力。取雙腎稱重計(jì)算腎重指數(shù)(腎重/體重，KI)；10％福爾馬林固定，石蠟切片，PASM染色觀察腎小球細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)堆積;采用免疫組化、免疫印跡(Westerm-blot)方法檢測(cè)腎臟組織中NF-κB p65、MCP-1蛋白的表達(dá)。數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。
　　

5、 結(jié)果：
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，2型糖尿病成模大鼠均表現(xiàn)早期糖尿病腎病典型變化。
　　 與NC組比較，DM組及三個(gè)治療組FPG、TC、TG、LDL-C、BUN、Scr、血清MDA、24hUP、腎重、KI、腎小球細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)堆積指數(shù)明顯增高(P＜0.01);體重、HDL-C水平、SOD活力明顯降低(P＜0.01)；腎臟組織NF-κBp65、MCP-1表達(dá)水平明顯增高(P＜0.01)。
　　 與DM組比較，三個(gè)治

6、療組FPG、TC、TG、LDL-C、BUN、Scr、血清MDA、24hUP、腎重、KI、腎小球ECM堆積指數(shù)明顯降低(P＜0.01或P＜0.05)；體重、HDL-C水平、SOD活力明顯增加(P＜0.01);腎臟組織NF-κB p65、MCP-1表達(dá)水平明顯降低(P＜0.01)。
　　 與PDTC組及PIO組比較，PDTC+PIO組上述各指標(biāo)進(jìn)一步改善；腎組織NF-κB p65、MCP-1表達(dá)水平進(jìn)一步下降，腎臟病理及功能改善更明

7、顯(除了PDTC+PIO組血糖與PIO組比，P＞0.05；其它指標(biāo)相比，均P＜0.01)。
　　 各組大鼠24hUP、血清BUN、Scr、腎小球ECM堆積指數(shù)等均與NF-κB p65、MCP-1表達(dá)水平呈正相關(guān)(P＜0.01)MCP-1表達(dá)水平與NF-κB p65表達(dá)水平呈正相關(guān)(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 (1)2型糖尿病大鼠出現(xiàn)持續(xù)蛋白尿、典型糖尿病腎病的早期病理改變，并與NF-κB p65、MCP

8、-1表達(dá)呈正相關(guān)；
　　 (2)PDTC和PIO藥物干預(yù)后，均可改善糖脂代謝，降低尿蛋白；下調(diào)腎臟組織NF-κB p65、MCP-1的表達(dá)，改善腎臟病理及腎功能，延緩糖尿病腎病的進(jìn)展。說明PDTC和PIO對(duì)糖尿病大鼠腎臟均有保護(hù)作用；PDTC和PIO聯(lián)用較單藥效果更好。
　　 (3)PDTC和PIO的作用機(jī)制與減輕氧化應(yīng)激、抑制NF-κB p65活性，從而下調(diào)MCP-1的過度表達(dá)，減少單核巨噬細(xì)胞在腎臟組織的浸潤(rùn)，減輕腎