桑椹中白藜蘆醇及其苷的含量和光穩(wěn)定性研究及MaPAL基因的克隆分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、桑椹是食藥兩用的水果,是中醫(yī)藥中的常用滋補(bǔ)藥材,具有生津止渴、滋陰補(bǔ)血、補(bǔ)肝益腎、固精安胎、烏須黑發(fā)、聰耳明目、安神養(yǎng)心、潤腸通便、健步履、利關(guān)節(jié)、祛風(fēng)濕、解酒等功效,常用于治療糖尿病、肝腎陰虛、失眠耳鳴、津液不足、風(fēng)濕、便秘、須發(fā)早白、神經(jīng)衰弱等癥狀。桑椹的藥用物質(zhì)基礎(chǔ)之一是其中的白藜蘆醇及其苷。白藜蘆醇及其苷具有顯著的抗癌抑癌、保護(hù)心血管、抗氧化和抗自由基、保護(hù)神經(jīng)、抗炎、抗細(xì)菌和真菌、拮抗內(nèi)皮素的作用,并顯示雌激素樣活性,影響骨代

2、謝。
   桑椹是富含白藜蘆醇的食物,但迄今對桑椹中的白藜蘆醇及其苷的研究尚少。為了確定桑椹的最佳采收期,篩選白藜蘆醇總含量更高的桑椹品種,為市場提供保健功能更佳的桑椹,本實(shí)驗(yàn)研究了桑椹成熟過程中白藜蘆醇及其苷的含量變化,比較了不同品種桑椹中白藜蘆醇及其苷的含量,并研究了桑椹汁中白藜蘆醇及其苷的光穩(wěn)定性。
   本文以重慶西里蠶種廠所產(chǎn)桑椹為材料,建立了同時測定桑椹中白藜蘆醇及其苷含量的RP-HPLC方法,色譜柱為phe

3、nomenex C18柱(150 mm×4.6 mm,4μm),以甲醇-水為流動相梯度洗脫,檢測波長305 nm,流速0.8 mL/min。對該方法進(jìn)行了方法學(xué)評價,結(jié)果顯示:該方法測定桑椹中白藜蘆醇及其苷含量的專屬性強(qiáng);分別在0.5~50μg/mL和2~100μg/mL進(jìn)樣濃度范圍線性關(guān)系良好;儀器精密度和日內(nèi)精密度均良好,RSD<4%;準(zhǔn)確度良好,加樣回收率95%~105%之間;重復(fù)性良好,RSD<1.5%。采用該含量測定方法測定了

4、紅果2號成熟過程中白藜蘆醇及其苷的含量變化,并比較了紅果2號、紅果1號、西農(nóng)1號、嘉陵30號1系、嘉陵30號2系等五個果桑品系的成熟桑椹的白藜蘆醇及其苷含量。結(jié)果顯示,在桑椹發(fā)育全程中白藜蘆醇苷的含量始終高于白藜蘆醇,它們在桑椹中的含量均為紅果中期最高,紫果時下降;五個桑椹品種中,西農(nóng)1號紅果的總白藜蘆醇含量最高,達(dá)94.5μg/g。確定桑椹的最佳采摘期為紅果剛轉(zhuǎn)紫時。
   本文還考察了與桑椹汁或花色苷溶液混合的反式白藜蘆醇及

5、其苷對紫外光的穩(wěn)定性,以反式白藜蘆醇及其苷轉(zhuǎn)化為順式的百分率為穩(wěn)定性評價指標(biāo),發(fā)現(xiàn)在低濃度花色苷存在時,反式白藜蘆醇及其苷的異構(gòu)轉(zhuǎn)化率更高,提示反式白藜蘆醇及其苷在紫外線下的反應(yīng)活性較花色苷更高;而高濃度的花色苷可抑制紫外線引起的反式白藜蘆醇、反式白藜蘆醇苷的變構(gòu)作用,其原因可能是高濃度的花色苷可吸收大部分紫外光,使實(shí)際到達(dá)白藜蘆醇及其苷分子的紫外光強(qiáng)度大大降低,從而保護(hù)反式白藜蘆醇及其苷,降低它們轉(zhuǎn)化為順式異構(gòu)體的百分率。加入桑椹汁后

6、,反式白藜蘆醇及其苷在紫外光下的穩(wěn)定性增強(qiáng),其原因也可能是桑椹汁中大量的花色苷對白藜蘆醇及其苷有保護(hù)作用。
   克隆了桑中苯丙氨酸氨基裂解酶的基因MaPAL的cDNA序列。該基因cDNA全長為含有一個2181 bp的開放閱讀框(ORF),能夠編碼含有726個氨基酸殘基的蛋白;該蛋白分子量為78.49 kDa,預(yù)測等電點(diǎn)(pI)8.2,分子式是C3453H5530N956O1074S27;分布在葉綠體或類囊體中。本文還對MaPA

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