阿托伐他汀聯(lián)合脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)心功能保護(hù)作用.pdf

1、研究背景：
　　 脂肪組織來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療心肌梗死具有潛在價(jià)值，但由于干細(xì)胞在梗死組織中存活率及分化率低，影響治療效果。主要原因是心梗后，心肌組織處于缺血、缺氧微環(huán)境，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能受損、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及氧化應(yīng)激激活。他汀類藥物抗炎、抗氧化應(yīng)激、促血管增生、保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞等多效性在基礎(chǔ)及臨床研究均得到證明。與此同時(shí)，有研究表明干細(xì)胞體外預(yù)先誘導(dǎo)向心肌細(xì)胞分化有利于提高干細(xì)胞在體內(nèi)向心肌細(xì)胞分化率。因此，我們假設(shè)：(1)阿托

2、伐他汀可通過(guò)其多效性改善心肌微環(huán)境，從而可望提高干細(xì)胞存活率；(2)干細(xì)胞體外預(yù)先誘導(dǎo)向心肌細(xì)胞分化將可有利于提高體內(nèi)分化率。
　　 研究目的：
　　 本研究主要目的是評(píng)價(jià)阿托伐他汀聯(lián)合預(yù)誘導(dǎo)分化脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)急性心梗大鼠心功能協(xié)同保護(hù)作用。
　　 研究方法：
　　 (1)結(jié)扎雄性SD大鼠(200-220g體重)左前降支冠狀動(dòng)脈，心梗模型構(gòu)建成功后24小時(shí)給予阿托伐他汀(1mg/kg/d)灌胃，對(duì)

3、照組給予同等量生理鹽水。心梗后第1天及阿托伐他汀治療14天后心臟超聲評(píng)估大鼠心功能。心功能評(píng)價(jià)結(jié)束后，取阿托伐他汀治療14天后大鼠心梗邊緣區(qū)組織用于評(píng)價(jià)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度、MPO活力、炎癥因子(Hs-CRP、VCAM-1和TNF-α)表達(dá)以及毛細(xì)血管密度。
　　 (2)分離雌性SD大鼠(100-120g體重)腹股溝皮下脂肪組織用于脂肪問(wèn)充質(zhì)干細(xì)胞分離與培養(yǎng)；分離SD乳鼠(出生1-3天)心肌組織進(jìn)行心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)。取第4代脂肪問(wèn)充

4、質(zhì)干細(xì)胞用于本實(shí)驗(yàn)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)脂肪問(wèn)充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物(CD29、CD44、CD31和CD45)表達(dá)；誘導(dǎo)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞分化。Transwell培養(yǎng)皿中進(jìn)行脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(上層)和乳鼠心肌細(xì)胞(下層)聯(lián)合培養(yǎng)(細(xì)胞量比例1∶5)，每48h換液一次；脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞和脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)作為對(duì)照。聯(lián)合培養(yǎng)14天后，采用Western blot、 real-time PCR和細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)聯(lián)合培養(yǎng)脂肪間充

5、質(zhì)干細(xì)胞肌鈣蛋白-1和GATA-4表達(dá)。
　　 (3)阿托伐他汀治療14天后，將1×106(懸浮于100μL PBS液中)預(yù)誘導(dǎo)分化脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞或脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞或同體積PBS在心梗邊緣區(qū)5個(gè)點(diǎn)進(jìn)行注射。本實(shí)驗(yàn)共分為5組：阿托伐他汀+PBS，阿托伐他汀+脂肪問(wèn)充質(zhì)干細(xì)胞，阿托伐他汀+預(yù)誘導(dǎo)分化脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，對(duì)照組+預(yù)誘導(dǎo)分化脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，假手術(shù)組+PBS。移植28天后心臟超聲評(píng)估大鼠心功能，取心梗邊緣區(qū)心肌組織評(píng)價(jià)細(xì)

6、胞凋亡指數(shù)和real-time PCR檢測(cè)bcl-2/bax表達(dá)、組織免疫熒光評(píng)價(jià)移植干細(xì)胞存活率及分化率，Masson染色評(píng)估心臟重塑。
　　 研究結(jié)果：
　　 (1)14天后，阿托伐他汀組大鼠心梗邊緣區(qū)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度、MPO活力及炎癥因子表達(dá)量均明顯少于對(duì)照組(P＜0.05)，毛細(xì)血管密度高于對(duì)照組(P＜0.05)，且阿托伐他汀組大鼠心功能優(yōu)于對(duì)照組(P＜0.05)。
　　 (2)脂肪問(wèn)充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物

7、CD29(100％)、CD44(99.6％)、CD45(0.1％)和CD31(0.1％)；脂肪問(wèn)充質(zhì)干細(xì)胞具有向成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞分化潛能。與乳鼠心肌細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)14天后，脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞可表達(dá)肌鈣蛋白-1和GATA-4，real-time PCR檢測(cè)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞肌鈣蛋白-1和GATA-4表達(dá)率分別為13.1±1.6％和8.4±1.8％。
　　 (3)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞移植28天后，與其他組相比，細(xì)胞存活率及心臟重塑在阿托伐他