南蛇藤抗炎及免疫抑制活性部位的研究.pdf

1、類風濕性關節(jié)炎是一種慢性的、致殘性自身免疫性疾病，其發(fā)病率為0.3%-1%，我國大約有400萬患者。治療類風濕性關節(jié)炎的常規(guī)用藥包括糖皮質(zhì)激素（例如，可的松和強的松），非甾體抗炎藥物（NSAIDS；布洛芬和萘普生），緩解病情的抗風濕藥物（DMARDs；甲胺喋呤（MTX）和來氟米特），生物制劑（腫瘤壞死因子-α抑制劑）。除了其高成本外，長期使用過多的上述藥物通常導致嚴重的不良反應及毒副反應，還包括正在接受生物制劑治療患者的多系統(tǒng)感染風險。

2、因此，基于中藥或天然植物產(chǎn)品類的補充和替代藥物（CAM）的替代療法，由于其較好的臨床療效、較少的毒副作用及可長期用藥的可能性，越來越受到臨床醫(yī)學的重視及患者的歡迎。 南蛇藤屬衛(wèi)矛科南蛇藤屬植物，中國民間以根，莖，葉和藤用于治療類風濕性關節(jié)炎、骨關節(jié)炎、腰痛等病證。過山楓（Celastrus aculeatus Merr）是南蛇藤屬植物，在中醫(yī)臨床上作為南蛇藤藥材來源之一。我們的前期藥理學實驗已證明，過山楓乙醇提取物具有抗炎及鎮(zhèn)痛

3、作用，對佐劑性關節(jié)炎大鼠關節(jié)炎癥具有顯著的抑制作用。但是，過山楓中究竟是哪些成分在發(fā)揮藥效作用，迄今為止國內(nèi)外尚無研究報告。闡明過山楓中抗炎及抑制免疫的活性部位及有效成分，對過山楓的藥物開發(fā)將具有重要的意義。 本課題采用藥理學追蹤指導化學活性分離的方法，應用現(xiàn)代層析技術及波譜方法從過山楓中分離活性部位并鑒定代表化合物化學結構；同時，運用快速細胞培養(yǎng)MTT的實驗手段，從體外的角度驗證過山楓活性部位對T淋巴細胞增殖的抑制作用，以期明

4、確其抗炎及抑制免疫的活性部位，并發(fā)現(xiàn)該部位中的代表化合物，作為質(zhì)量控制的參考。 1.南蛇藤屬植物資源調(diào)查 目的：概述南蛇藤屬植物的種屬分類，形態(tài)特征及地理分布，了解南蛇藤屬化學成分及藥理活性的研究進展。 方法：采用本草考證和文獻調(diào)研的方法對南蛇藤屬植物的研究進展做一綜述。 結果：我國產(chǎn)南蛇藤屬植物30種，分布廣泛；迄今為止共從南蛇藤屬植物中分離得到最多的成分是倍半萜及倍半萜衍生物，其中得到148余種倍半萜

5、，主要存在于該屬植物的根皮、葉、種子中。三萜類成分主要存在于南蛇藤屬植物的根皮中，主要類型有羽扇豆烷型和齊墩果酸型。目前報道的大約有14種，其中報道最多見的是南蛇藤素。在南蛇藤屬植物中還發(fā)現(xiàn)了二萜成分，到目前為止報道的有4種。黃酮類化合物主要存在于南蛇藤屬植物的葉中。另有其它幾類物質(zhì)。南蛇藤屬植物及其提取物或成分具有多種生理藥理活性。這些生理藥理活性主要包括抗腫瘤、抗炎及抗病原微生物作用；抗生育作用和抗氧化作用。以及昆蟲拒食作用、松弛平

6、滑肌作用、抑菌抑病毒作用等。 結論：南蛇藤屬植物資源豐富，價廉易得，而其中發(fā)現(xiàn)的大部分化學成分藥理活性明確，且目前所用于治療的疾病多為臨床疑難雜癥.所以具有很好的開發(fā)利用價值。 2.過山楓抗炎及免疫抑制部位的提取分離 目的:過山楓（Celastrus aculeatus Merr）中的抗炎及免疫抑制部位活性部位提取分離方法的研究 方法:95%食用乙醇提取過山楓粗粉，水沉工藝除雜，獲得過山楓乙醇浸膏。稱取過

7、山楓醇提物，以適量硅藻土拌樣，投入索氏提取器中，以20倍量石油醚/乙酸乙酯/正丁醇分別進行提取。獲得不同極性的部位。經(jīng)化學方法和體外生物學方法檢測后，確定過山楓抗炎活性部位。 結果:初步確定過山楓中總?cè)铺崛》蛛x工藝及方法。 結論:經(jīng)實驗檢測證明過山楓乙醇提取物的乙酸乙酯部分可能為三萜富集部位，具有一定抗炎活性。 3.過山楓總?cè)贫ㄐ远繙y定 目的:建立過山楓（Celastrus aculeatus Me

8、rr）總?cè)铺崛∥锒ㄐ远繙y定方法。 方法;以TLC方法，試驗不同溶劑系統(tǒng)上行展開，采用硫酸乙醇，加熱顯色，建立過山楓所含的總?cè)贫ㄐ詼y定方法。采用香草醛-冰醋酸、高氯酸比色法，建立過山楓提取物中的總?cè)祁惓煞趾繙y定方法。 結果:過山楓中三萜類成分TLC條件為：石油醚：乙酸乙酯：氯仿：冰醋酸=6：2：1：0.1；以10%硫酸乙醇于120℃顯色5分鐘，可見紫紅色或藍紫色斑點。過山楓總?cè)祁惓煞制骄繛?7.93%，RS

9、D=1.60%（n=5）；過山楓藥材總?cè)祁惓煞制骄繛?2.87%，RSD=3.39%（n=5）。過山楓乙醇提取物石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位總?cè)祁惓煞制骄糠謩e為41.57%，RSD=3.28%（n=5）；48.34%，RSD=2.97%（n=5）；39.82%，RSD=4.13%（n=5）。 結論:本實驗所建立的方法可作為南蛇藤藥材及提取物總?cè)瀑|(zhì)量評估的一種檢測手段。 4.過山楓不同極性部位對體外培

10、養(yǎng)小鼠淋巴細胞增殖作用的影響 目的:檢測過山楓不同極性提取物對小鼠淋巴細胞增殖作用的影響。 方法:采用小鼠脾淋巴細胞進行體外培養(yǎng)，觀察過山楓不同活性部位對淋巴細胞增殖的抑制作用，以四甲基偶氮唑鹽（MTT）比色分析法進行測定。 結果:石油醚1組、乙酸乙酯1組、正丁醇2組與ConA組相比較，結果有顯著性差異。（*P<0.05） 結論:過山楓乙醇提取物石油醚1組、乙酸乙酯1組、正丁醇2組與ConA組相比較，對小

11、鼠T淋巴細胞增殖均有明顯的抑制作用。其中以石油醚1組、乙酸乙酯1組的作用更強。且各組抑制作用均表現(xiàn)出一定的量效關系。 5.過山楓醇提物乙酸乙酯部位柱分離及鑒定 方法:提取過山楓乙醇提取物的乙酸乙酯部分，并進行反復柱色譜，以光譜方法對分離得到的單體進行結構鑒定。 結果:離并鑒定了1個化合物，共獲得結晶97mg，得率為0.47%，鑒定為β-谷甾醇。 結論:該化合物在過山楓抗炎活性部位中含量較高，且為首次在該植