凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)與乳腺癌關(guān)系的研究.pdf

1、第一部分臨床研究
　　 目的：探討乳腺癌患者血漿凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)水平及其編碼區(qū)基因位點(diǎn)Thr147Ala（rs3742264）和Thr325Ile(rs1926447)的基因多態(tài)性的改變在臨床診治中的作用以及與高凝狀態(tài)的關(guān)系。
　　 方法：選取256例乳腺癌患者為研究對象，健康體檢正常的192例為對照組，ELISA及發(fā)色底物法分別測定血漿TAFI抗原、活性(TAFIAg、TAFIAct)水平，應(yīng)用聚合酶

2、鏈反應(yīng)-限制性內(nèi)切酶片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)技術(shù)檢測TAFIThr147Ala和Thr325Ile位點(diǎn)的基因多態(tài)性。
　　 結(jié)果：①TAFI的活性及抗原(TAFIAct、TAFIAg)在病例組和對照組分別為30.5±2.8μg/ml、100.6±15.2％和23.5±1.6μg/ml、82.7±11.2％，病例組TAFI水平明顯高于對照組，差異有顯著性(P＜0.001)。②乳腺癌患者TAFI抗原含量與活性水平隨臨床分期

3、而增高，各期之間的差異具有顯著性(P＜0.001)。③TAFIThr325Ile基因多態(tài)性中，3種基因型Thr/Thr(CC)、Thr/Ile(CT)、Ile/Ile(TT)的分布頻率分別是19.9％，51.6％和28.5％,而對照組分別為34.4％,49.5％和16.1％，可見病例組含Ile的形式，即Ile/Ile和Thr/Ile顯著高于對照組[OR:2.106;(95％CI:1.379-3.217，P＜0.001)]。等位基因T在病

4、例組的分布亦顯著高于對照組[OR:1.718;(95％CI:1.316-2.243);P＜0.001]。④病例組和對照組Thr325Thr、Thr325Ile、Ile325Ile三種基因型之間血漿TAFI抗原水平具有顯著性差異，其中Thr325Thr者血漿TAFI抗原水平最高，Ile325Ile者血漿TAFI抗原水平最低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。⑤Thr147Ala基因多態(tài)性在病例組與對照組中的頻率分布、以及與TAFI抗原水平

5、均無顯著性差異（P＞0.05）。
　　 結(jié)論：①乳腺癌患者血漿TAFI水平顯著高于對照組，且隨臨床分期而逐漸增高。②乳腺癌患者TAFIThr325Ile位點(diǎn)多態(tài)性表現(xiàn)為Ile325Ile（TT基因型）頻率增高，提示熱穩(wěn)定性及抗纖溶活性增高。③TAFI抗原水平受Thr325Ile位點(diǎn)多態(tài)性的影響，其中Thr325Thr（CC基因型）型最高，Ile325Ile(TT基因型)最低。④檢測血漿TAFI水平及Thr325Ile位點(diǎn)多態(tài)性可

6、作為乳腺癌診斷及病情嚴(yán)重程度的指標(biāo)。⑤乳腺癌患者體內(nèi)呈現(xiàn)高凝狀態(tài)，其原因既有凝血激活（血漿纖維蛋白原及D-二聚體水平增高），又有纖溶活性降低（血漿TAFI抗原及活性水平增高）。提示臨床對腫瘤病人應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)目鼓委煛?br>　　 第二部分實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的：探討靶向CPB2基因的RNA干擾(RNAi)對乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞TAFI表達(dá)以及對乳腺癌細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移性的影響。
　　 方法：以乳腺癌MDA-MB-

7、231細(xì)胞系為研究對象，利用RNA干擾技術(shù)，通過設(shè)計(jì)小干擾RNA(siRNA)，靶向抑制乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞系中CPB2基因的表達(dá)，逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、蛋白質(zhì)免疫印跡(WesternBlot)檢測轉(zhuǎn)染脂質(zhì)體siRNA后乳腺癌細(xì)胞中TAFImRNA及蛋白的表達(dá)水平;應(yīng)用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測干擾后MDA-MB-231細(xì)胞的侵襲能力;MTT實(shí)驗(yàn)測定轉(zhuǎn)染后MDA-MB-231細(xì)胞的存活和生長情況。
　

8、　 結(jié)果：siRNA抑制CPB2表達(dá)后，TAFImRNA及其蛋白表達(dá)水平顯著下降，蛋白抑制率從42.6％到55.4％;Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)siRNA轉(zhuǎn)染組穿膜細(xì)胞數(shù)84.80±4.82，顯著低于對照組140.20±11.78(P＜0.05);MTT實(shí)驗(yàn)測定轉(zhuǎn)染后MDA-MB-231細(xì)胞24和48小時(shí)的吸光度為0.750±0.034和0.420±0.042，顯著低于對照組0.840±0.044和0.755±0.046(P＜0.