美沙拉嗪聯(lián)合思密達(dá)治療潰瘍性結(jié)腸炎大鼠的療效及機(jī)制.pdf

1、炎癥性腸病(Inflammatory bowel disease，IBD)是一種病因尚不十分清楚的慢性非特異性腸道炎癥性疾病，包括潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis，UC)和克羅恩病(Crohn's disease，CD)。本病在西方國(guó)家相當(dāng)常見(jiàn)，近年來(lái)我國(guó)IBD的患病人數(shù)呈明顯上升趨勢(shì)，主要是UC患病人數(shù)劇增。目前常用的治療炎癥性腸病(CD、UC)的藥物主要包括水楊酸類(lèi)、糖皮質(zhì)激素和免疫抑制劑，美沙拉嗪(mesalaz

2、ine，商品名沙爾福)是一種新型5一氨基水楊酸制劑，是治療潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)的有效藥物，目前在臨床應(yīng)用廣泛。上述三類(lèi)藥物雖然有一定的療效，但是仍存在療效不理想、療程長(zhǎng)依從性差、副作用大等一系列問(wèn)題。由腸上皮單層細(xì)胞和細(xì)胞間連接組成的腸黏膜屏障形成腸道的第一道防御屏障，大量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)提示腸黏膜屏障功能受損與炎癥性腸病的病理生理之間有存在交互關(guān)系，腸黏膜屏障功能受損是疾病的表現(xiàn)，同時(shí)是IBD的潛在致病

3、因素并增加IBD復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。鞏固腸黏膜屏障功能有利于提高腸道黏膜的防御功能，維持腸黏膜免疫調(diào)節(jié)平衡，促進(jìn)腸黏膜修復(fù)以及有助于維持緩解減少疾病復(fù)發(fā)。而美沙拉嗪主要是通過(guò)抑制炎癥間接減輕對(duì)腸黏膜屏障的損傷，而非直接修復(fù)損傷腸黏膜屏障。已有研究表明，思密達(dá)可有效修復(fù)慢性腹瀉患者腸道黏膜損傷.
　　我們假設(shè)是:
　　思密達(dá)可能通過(guò)有效修復(fù)患者腸道黏膜損傷等途徑鞏固IBD患者腸粘膜屏障功能，促進(jìn)炎癥緩解。思密達(dá)聯(lián)合美沙拉嗪治療能夠得到

4、更好的治療效果。
　　目的:
　　本研究通過(guò)觀察思密達(dá)聯(lián)合美沙拉嗪治療大鼠UC模型腸道屏障功能改善情況，確定美沙拉嗪聯(lián)合思密達(dá)治療潰瘍性結(jié)腸炎大鼠的療效及機(jī)制，為臨床聯(lián)合治療潰瘍性結(jié)腸炎提供依據(jù)。
　　方法:
　　清潔級(jí)雄性SD大鼠80只(170-190g)，隨機(jī)分成:模型組70只和對(duì)照組10只。模型組大鼠每日飲用3％ DSS水，連續(xù)7天后正常飲水7天，以建立潰瘍性結(jié)腸炎模型。對(duì)照組每日飲用蒸餾水。模型組隨機(jī)分成

5、4組，分別給予美沙拉嗪、思密達(dá)、美沙拉嗪聯(lián)合思密達(dá)、蒸餾水灌胃治療14天，觀察大鼠一般情況，14天后從每組中隨機(jī)抽取8只給予乳果糖甘露醇灌胃，搜集尿液采用高效液相色譜分析法檢測(cè)大鼠腸道通透性改變，處死所有剩余存活大鼠采集大鼠結(jié)腸標(biāo)本。評(píng)估結(jié)腸病理變化，分別利用RT-PCR和Western Blot測(cè)定腸道Occludin、Claudin3、ZO-1、Claudin2表達(dá)的水平。
　　結(jié)果:
　　1.潰瘍性結(jié)腸炎模型的建立:經(jīng)

6、DSS處理后大鼠體重下降， HE染色發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)端結(jié)腸炎癥明顯，表現(xiàn)為腸上皮隱窩擴(kuò)張、潰瘍，炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，在實(shí)驗(yàn)的中期炎癥表現(xiàn)最重，后逐漸緩解。高效液相色譜分析法檢測(cè)乳果糖甘露醇比值升高，大鼠腸道通透性升高。腸上皮緊密連接蛋白ZO-1，occludin，claudin3 mRNA等表達(dá)水平降低，claudin2 mRNA表達(dá)水平增加。
　　2.各組給予藥物治療后，腸道通透性測(cè)量（乳果糖甘露醇比值L/M）結(jié)果:對(duì)照組＜美沙拉嗪思密達(dá)組＜

7、美沙拉嗪組＜思密達(dá)組＜DSS組，美沙拉嗪思密達(dá)組通透性較正常組改變最輕，然而與美沙拉嗪組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。DSS潰瘍性結(jié)腸炎模型給予美沙拉秦聯(lián)合思密達(dá)、美沙拉嗪、思密達(dá)藥物治療2周后，SD大鼠腸上皮緊密連接蛋白組成較DSS組改變，claudin2 mRNA表達(dá)水平較DSS組降低，以思密達(dá)組為著;claudin3 mRNA較DSS組均表達(dá)升高，以美沙拉嗪組為著;ZO-1，occludinmRNA表達(dá)水平較DSS組升高，以美沙拉嗪聯(lián)合思密達(dá)

8、組為著。claudin3、ZO-1 Westem blot結(jié)果與RT-PCR結(jié)果一致。
　　結(jié)論：
　　無(wú)論從癥狀和體征上，DSS處理大鼠的表現(xiàn)和人類(lèi)潰瘍性結(jié)腸炎表現(xiàn)相似，因此DSS經(jīng)飲水途徑可以成功建立潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型。模型動(dòng)物腸上皮通透性增加，腸上皮緊密連接損傷，緊密連接蛋白組成改變。DSS潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型給予美沙拉秦聯(lián)合思密達(dá)、美沙拉嗪、思密達(dá)藥物治療后，可以通過(guò)改變腸上皮緊密連接蛋白表達(dá)，影響腸黏膜通透性等途