TLR2激動劑云芝多糖減輕小腸輻射損傷和輔助結(jié)直腸癌放療的機(jī)制研究.pdf

1、小腸是輻射的敏感組織,輻射對小腸的嚴(yán)重?fù)p傷極大地限制了腹部腫瘤放射治療和突發(fā)核事故中腸型放射病的救治。因此迫切需要找到預(yù)防和治療小腸輻射損傷的藥物來解決這些難題。
　　在眾多腸道輻射保護(hù)劑的研究中,To ll樣受體5激動劑鞭毛蛋白為腸道的輻射防護(hù)帶來了振奮人心的結(jié)果。最近的研究顯示TLR2具有保持腸道上皮細(xì)胞功能性屏障完整的作用,其基因的缺失會加速黏膜損傷和對結(jié)腸炎易感。2011年,來源于蘑菇的云芝多糖polysaccharide

2、 Krestin(PSK)被證實也是TLR2的激動劑,且PSK因為激活N K細(xì)胞和C D8+T細(xì)胞抑制腫瘤在臨床實驗中已有應(yīng)用。鑒于此,本論文著重研究PSK對10Gy全身照射后小鼠小腸保護(hù)作用的靶細(xì)胞及機(jī)制,然后將其應(yīng)用于小鼠結(jié)直腸原位癌模型的放療中,研究其輔助放療抑制腫瘤生長的機(jī)制,為其應(yīng)用于輔助腹部腫瘤放射治療進(jìn)行可行性探索。
　　一、云芝多糖減輕10Gy全身照射后小腸輻射損傷的機(jī)制研究
　　目的：研究TLR2激動劑PS

3、K對10 Gy全身照射后小腸輻射防護(hù)作用的機(jī)制。
　　方法：將C57BL/6J雄性小鼠隨機(jī)分為10Gy單純照射組、照前0.5小時給藥組、照后24小時給藥組,PSK濃度為200mg/kg,腹腔注射,C57BL/6小鼠接受10Gy(200cGy/min)X線全身照射后,分別于照后4小時、6小時、14小時、24小時、48小時、72小時和96小時取小腸利用雙重免疫熒光染色和原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)研究小腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)

4、胞(特指絨毛部)和隱窩細(xì)胞的凋亡情況;利用Ki-67和PCNA免疫組化研究其增殖情況;利用雙重免疫熒光染色及免疫組化研究Bax、Bcl-2、Akt1、Akt2、Akt3、p-Akt的表達(dá)情況;觀察記錄10Gy全身照射后C57BL/6小鼠、TLR2-/-和AKT1+/-小鼠的生存,繪制生存曲線。
　　結(jié)果：10Gy全身照射后,小腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡在4小時和6小時較明顯;小腸上皮細(xì)胞的凋亡在6小時和96小時較明顯;隱窩細(xì)胞在各個時

5、間點凋亡都較明顯。PSK照前0.5小時給藥通過減少凋亡蛋白Ba x的表達(dá),升高抗凋亡蛋白Akt2、p-Akt、Bc l-2的表達(dá)減少內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡,但不能減少上皮細(xì)胞和隱窩細(xì)胞的凋亡。PSK照后24小時給藥通過升高隱窩細(xì)胞的Akt1、Akt3、p-Akt的表達(dá)促進(jìn)其增殖。PSK照前0.5小時或照后24小時給予均延長10Gy全身照射C57BL/6小鼠的生存時間,但在TLR2-/-和AK T1+/-小鼠中作用消失。
　　結(jié)論：PSK照

6、前0.5小時給藥減少小腸內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,PSK照后24小時給藥促進(jìn)小腸隱窩增殖。PSK通過TLR2/Akt通路對小腸起到輻射防護(hù)作用。
　　二、云芝多糖輔助放療減少結(jié)直腸癌血管生成和增殖的作用研究
　　目的：建立C57BL/6小鼠結(jié)直腸原位癌模型,研究PSK在結(jié)直腸原位癌放療中的作用。
　　方法：在C57BL/6小鼠中建立氧化偶氮甲烷(AOM)/葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘發(fā)的結(jié)直腸原位癌模型;將模型鼠分為4組,分別為不處理

7、組(Untrea ted)、PSK單給藥組(PSK)、單純照射組(10Gy)、PSK給藥聯(lián)合照射組(10Gy+PSK),每組22只,腹部照射采用10Gy的電子束(6MeV,200cGy/min),PSK濃度為200mg/kg,于每次放療前半小時腹腔注射給予,放療每周1次,共進(jìn)行4次;每組中11只用來觀察體重變化及生存率;每組另有11只于4周后取材,統(tǒng)計結(jié)直腸腫瘤大小及分布,腫瘤組織的微血管密度、VE GF表達(dá)情況,觀察小腸組織的病理改變

8、及其血管生成素-1(Angiopoietin-1)的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：10Gy+PSK組與不處理組、PSK單給藥組、單純照射組相比較顯著減小腫瘤體積。10Gy+PSK組與單純照射組相比較顯著減少腫瘤組織微血管密度,保持小腸結(jié)構(gòu)完整性,但對小腸Angiopoietin-1的表達(dá)沒有影響。10Gy+PSK組顯著減少模型鼠的體重?fù)p失,顯著延長其生存時間。
　　結(jié)論：PSK能輔助放療減小結(jié)直腸癌的腫瘤體積,減少腫瘤組織的微血管密