周期性張應(yīng)力對(duì)大鼠生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞的增殖和凋亡作用.pdf

1、目的：
　　1.探討不同強(qiáng)度下張應(yīng)力對(duì)生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞的作用，對(duì)增值和凋亡的影響。并初步研究周期性張應(yīng)力對(duì)生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞Hippo信號(hào)通路的影響。
　　2.檢驗(yàn)大鼠跑臺(tái)裝置造大鼠骨關(guān)節(jié)炎模型，同時(shí)于對(duì)照組給予口服環(huán)孢素A觀察藥物干預(yù)組能否改善骨關(guān)節(jié)炎病變的程度。檢測(cè)凋亡相關(guān)基因及蛋白的變化
　　3.建立大鼠運(yùn)動(dòng)動(dòng)物模型，觀察不同強(qiáng)度的運(yùn)動(dòng)量對(duì)生長(zhǎng)板軟骨的影響。
　　方法：
　　1.取大鼠生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞的分離培

2、養(yǎng)，采用四點(diǎn)彎曲張力儀給予生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞不同強(qiáng)度應(yīng)力刺激。用Annexxin V-FITC/PI染色免疫熒光觀察細(xì)胞凋亡，并行流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。行.Real-time PCR和Western blot檢測(cè)增殖和凋亡相關(guān)基因的表達(dá)和蛋白的變化。
　　2.采用大鼠跑臺(tái)建立骨關(guān)節(jié)炎模型并同時(shí)設(shè)組給予免疫抑制劑 CSA干預(yù)，用 MR和microCT檢測(cè)和評(píng)估骨關(guān)節(jié)炎模型，HE切片觀察骨關(guān)節(jié)炎改變，Real-time PCR檢測(cè)骨關(guān)節(jié)

3、炎相關(guān)基因的表達(dá)，Western blot檢測(cè)骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)蛋白的表達(dá)。
　　3.采用大鼠跑臺(tái)建立大鼠運(yùn)動(dòng)增殖模型，用microCT檢測(cè)運(yùn)動(dòng)模型并用HE切片觀察軟骨增殖改變。行Real-time PCR和Western blot檢測(cè)增殖相關(guān)基因的表達(dá)和蛋白的變化。
　　結(jié)果：
　　1.在較低的力學(xué)強(qiáng)度（2000μ）下生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞軟骨細(xì)胞表達(dá)COL2基因以及COL2和SOX9蛋白表達(dá)量明顯增加，而RUNX2基因和蛋白表達(dá)

4、增加不明顯。中等力學(xué)強(qiáng)度時(shí)(3000μ、4000μ)，生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞RUNX基因和蛋白的表達(dá)量明顯增加，而COL2基因以及COL2和SOX9蛋白表達(dá)量較未刺激細(xì)胞相比減少。在很高的力學(xué)強(qiáng)度刺激時(shí)（5000μ、6000μ）細(xì)胞MMP13及caspase9的基因表達(dá)上調(diào)，同時(shí)活化的caspase9蛋白表達(dá)量也增加。起保護(hù)作用的BCL2蛋白表達(dá)明顯減少。隨著應(yīng)力刺激強(qiáng)度的不斷增加，生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞凋亡不斷增加。同時(shí)檢測(cè)出在增殖和凋亡時(shí) YAP基

5、因和蛋白的高表達(dá)。
　　2.高強(qiáng)度的跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)（大于30km）模型動(dòng)物可檢測(cè)出影像學(xué)早期的骨關(guān)節(jié)炎改變，HE切片測(cè)量軟骨厚度減少，CASPASE9、MMP13、COL2、SOX9基因上調(diào)，活化CASPASE9蛋白表達(dá)增加，COL2、SOX9以及BCL2蛋白表達(dá)減少。CSA可減輕OA影像學(xué)表現(xiàn)，減輕骨關(guān)節(jié)炎程度。同時(shí)可降低凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。
　　3.運(yùn)動(dòng)可以增加 Ki67基因的表達(dá)量以及 PCNA的基因和蛋白的表達(dá)量，并同時(shí)上

6、調(diào)SOX9基因的表達(dá)和增加SOX9和COL2蛋白的表達(dá)量，
　　結(jié)論：
　　1.較低的力學(xué)強(qiáng)度（2000μ）下生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞分化主要以軟骨增殖趨勢(shì)為主。而中等力學(xué)強(qiáng)度時(shí)(3000μ、4000μ)，生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞主要以成骨分化趨勢(shì)為主。很高的力學(xué)強(qiáng)度刺激時(shí)（5000μ、6000μ）細(xì)胞凋亡明顯增加。生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞的增殖和凋亡可能與YAP的表達(dá)相關(guān)。
　　2.高強(qiáng)度的跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)（大于30km）可通過(guò)增加關(guān)節(jié)軟骨機(jī)械應(yīng)力導(dǎo)致大