烏司他丁對(duì)急性肝衰竭大鼠氧化應(yīng)激影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 急性肝衰竭是以肝性腦病、嚴(yán)重的凝血障礙、黃疸以及腹水為特征的嚴(yán)重臨床綜合征，具有極高的病死率。LPS和D-Gal可以誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性急性肝損傷，其表現(xiàn)和臨床上的急性肝衰竭癥狀極為相似。肝細(xì)胞的損傷主要由革蘭氏陰性菌釋放的內(nèi)毒素引起，而脂多糖是革蘭氏陰性桿菌細(xì)胞壁的主要組分之一。D-Gal可以增強(qiáng)LPS的肝毒性，因此我們通過(guò)腹腔注射LPS聯(lián)合D-Gal建立急性肝衰竭大鼠模型，觀察烏司他丁對(duì)急性肝衰竭大鼠肝臟氧化應(yīng)激指標(biāo)SOD，M

2、DA，iNOS和GSH-PX，血清ALT，AST水平、PPAR-γ表達(dá)水平，以及肝組織中L-FABP表達(dá)的影響，以探討烏司他丁是否通過(guò)氧化應(yīng)激途徑以及通過(guò)對(duì)PPAR-γ、L-FABP表達(dá)的影響，減輕LPS/D-Gal誘導(dǎo)的急性肝損傷。 方法： 將186只Sprague-Dawley系大鼠200-250g，隨機(jī)分為對(duì)照組(A組6只)，模型組(B組)和烏司他丁處理組(C組)，B、C組再按各個(gè)時(shí)間點(diǎn)分為6h、12h、24h、3

3、6h、48h5個(gè)亞組，每個(gè)亞組15只；另外B、C組各留15只，觀察其生存率。所有SD大鼠在22℃恒溫房?jī)?nèi)飼養(yǎng)，標(biāo)準(zhǔn)顆?；旌巷暳?由溫州醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供)喂養(yǎng)，自由飲水。B組和C組采用腹腔注射D-GalN(800mg/kg)，LPS(40μg/kg)構(gòu)建大鼠急性肝衰竭模型，C組造模后30 min腹腔內(nèi)注射UTI1×105 U/kg，B組腹腔內(nèi)注射等量生理鹽水，A組則腹腔注射2ml生理鹽水。 分別于建模后6h、12h、24h、36

4、h、48h各時(shí)間點(diǎn)處死各組大鼠，10％水合氯醛0.35ml/kg麻醉，切皮開(kāi)腹，下腔靜脈取血，血液離心5min(4℃，3000r/min)，抽取上清液備用，同時(shí)取出肝組織1mg，-80℃冰凍，冰浴下以組織勻漿管制備肝組織勻漿。同步取肝左葉(1cm*1cm)，浸泡于體積分?jǐn)?shù)為4％的多聚甲醛溶液48h后，進(jìn)行脫水、石蠟包埋、切片，HE染色、免疫組化等。 檢測(cè)指標(biāo)：全自動(dòng)生化儀檢測(cè)大鼠血清肝功能指標(biāo)，肝組織切片HE染色觀察肝臟病理組織

5、學(xué)改變。組織勻漿中檢測(cè)SOD活性、GSH-PX酶活力、MDA含量、iNOS酶等氧化應(yīng)激指標(biāo)，ELISA法測(cè)血清中PPAR-γ含量，免疫組化法觀察L-FABP在大鼠肝臟中的表達(dá)，分析UTI對(duì)氧化應(yīng)激早期肝細(xì)胞脂質(zhì)代謝的影響。 結(jié)果： 1、B組大鼠存活率為40％，C組大鼠存活率66.7％，模型組與正常組比較，ALT、AST明顯增高，24h達(dá)到最高峰，ALT為8346.7±1363.1；AST為9766.7±1274.1。模型

6、組肝組織呈彌漫性病變，肝細(xì)胞濁腫，變大，有脂質(zhì)沉積，可見(jiàn)點(diǎn)灶狀壞死，肝小葉完整，局部有炎細(xì)胞浸潤(rùn)，證明急性肝衰竭大鼠動(dòng)物模型建立。UTI治療組可明顯改善以上肝功能指標(biāo)，提高大鼠存活率，治療組肝組織病理改變明顯輕于模型組。 2、觀察肝組織中氧化應(yīng)激因子表達(dá)水平，結(jié)果顯示，隨著內(nèi)毒素?fù)p傷時(shí)間的延長(zhǎng)，肝組織中SOD活力逐漸降低，在24h時(shí)間點(diǎn)降到最低為，66.02±10.41，和模型組比較，治療組可以明顯提高SOD活性，為88.37±

7、8.01(P<0.01)，至48h，SOD基本恢復(fù)至正常水平；模型組MDA與正常組比較明顯升高，12h達(dá)高峰5.93±1.31，而治療組MDA含量明顯下降3.66±0.29(P<0.01)；模型組GSH-PX活力明顯降低，造模后12h降到低谷187.48±34.85，治療組可明顯提高GSH-PX活力351.35±28.72(P<0.01)，組織損傷因子模型組iNOS活力明顯升高，造模后短時(shí)間內(nèi)即迅速升高，12h達(dá)頂峰4.74±0.30，

8、而治療組iNOS活力明顯降低3.03±0.56(P<0.01)。模型組血清PPAR-γ含量降低，而烏司他丁組PPAR-γ水平明顯上升。免疫組化顯示，正常肝組織中L-FABP表達(dá)于細(xì)胞胞漿，含量較為豐富，分布均勻，模型組表達(dá)明顯減少，治療組的L-FABP表達(dá)有所增加， 結(jié)論： 1、烏司他丁對(duì)大鼠內(nèi)毒素誘導(dǎo)急性肝損傷具有明顯的保護(hù)作用。 2、烏司他丁通過(guò)氧化應(yīng)激途徑提高體內(nèi)的抗氧化防御機(jī)制，減輕急性肝損傷引起的氧化應(yīng)