魚藤素抗人膽管癌細(xì)胞TFK-1增殖效應(yīng)及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：
　　研究魚藤素對(duì)人膽管癌TFK-1細(xì)胞增殖、周期的影響，初步探討魚藤素抑制人膽管癌TFK-1細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其發(fā)生周期阻滯的機(jī)制。
　　方法：
　　倒置顯微鏡觀察不同濃度的魚藤素處理人膽管癌TFK-1細(xì)胞后，不同時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度魚藤素對(duì)人膽管癌TFK-1細(xì)胞克隆形成能力的影響；CCK-8法檢測(cè)魚藤素對(duì)人膽管癌TFK-1細(xì)胞存活率的影響；PI染色法檢測(cè)魚藤素對(duì)人膽管癌TFK-1細(xì)

2、胞周期的影響；免疫印跡（Western Blot）技術(shù)檢測(cè)魚藤素對(duì)人膽管癌TFK-1細(xì)胞周期蛋白、PI3K/AKT信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白表達(dá)及磷酸化的調(diào)節(jié)作用；免疫印跡（Western Blot）技術(shù)檢測(cè)采用AKT1-siRNA經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染后，不同濃度魚藤素對(duì)人膽管癌TFK-1細(xì)胞cyclinD1及cyclinE表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　魚藤素干預(yù)24h、48h后，細(xì)胞形態(tài)變化明顯，并呈藥物濃度和作用時(shí)間依賴性；不同濃度魚藤素

3、干預(yù)后，TFK-1細(xì)胞的克隆形成能力減弱；干預(yù)24h、48h、72h后，TFK-1細(xì)胞的存活率明顯下降，并呈藥物濃度和作用時(shí)間依賴性（P＜0.05）；魚藤素干預(yù)24h、48h、72h后TFK-1細(xì)胞G0/G1期比例增加，S期比例減少；周期蛋白p27Kip1和p21Cip1表達(dá)呈增加趨勢(shì)，cyclinE、cdk4、cdk6、cylinD1、cdk2表達(dá)逐漸減少，PI3K/AKT信號(hào)通路中AKT、p-AKT(Thr308)、p-GSK3β(

4、Ser9)表達(dá)呈減少趨勢(shì)，而PTEN、p-PTEN(Ser380)、PDK1、p-PDK1(Ser241)、GSK3β表達(dá)無明顯變化；siRNA-AKT轉(zhuǎn)染后，不同濃度魚藤素相關(guān)的cyclinE、cyclinD1表達(dá)減少效應(yīng)明顯減弱。
　　結(jié)論：
　　魚藤素可以誘導(dǎo)TFK-1細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞周期阻滯，減弱其克隆形成能力，抑制人膽管癌TFK-1細(xì)胞的增殖；引起細(xì)胞周期相關(guān)蛋白表達(dá)的改變；魚藤素對(duì)人膽管癌TFK-1細(xì)胞的這樣一種效應(yīng)