RhoC基因?qū)δ懝馨┘?xì)胞增殖和侵襲的影響.pdf

1、目的：將人RhoC基因正、反義真核表達(dá)載體分別轉(zhuǎn)染膽管癌QBC939細(xì)胞株，研究RhoC基因?qū)δ懝馨㏎BC939細(xì)胞株增殖和侵襲的影響。 方法：利用真核表達(dá)質(zhì)粒載體poDNA3．1／Hyg(+)構(gòu)建的包含RhoC正、反義基因全長(zhǎng)序列的重組表達(dá)質(zhì)粒載體，以陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染膽管癌QBC939細(xì)胞株，挑選潮霉素抗性克隆，RT-PCR檢測(cè)潮霉素抗性片段在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的表達(dá)，同時(shí)以空質(zhì)粒pcDN

2、A3．1／Hyg(+)轉(zhuǎn)染組作為對(duì)照，通過(guò)細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期以及體外Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)研究重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染對(duì)膽管癌QBC939細(xì)胞株增殖與侵襲能力的影響。 結(jié)果：RT-PCR顯示轉(zhuǎn)染細(xì)胞中潮霉素抗性基因片段有表達(dá)，轉(zhuǎn)染成功，與QBC939細(xì)胞及空載體(QBC939-V)對(duì)照細(xì)胞相比，克隆形成實(shí)驗(yàn)中正義RhoCeDNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞(QBC939-S)克隆形成數(shù)目明顯增加，反義RhoCcDNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞(QBC93

3、9-AS)克隆形成數(shù)目明顯減少，存在顯著性差異(P<0．05)；流式細(xì)胞儀分析結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后QBC939-AS細(xì)胞出現(xiàn)Gl期阻滯，而QBC939-S細(xì)胞Gl期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)增多，結(jié)果存在顯著性差異(P