胰島素樣生長因子Ⅰ對人早孕滋養(yǎng)細(xì)胞的作用及其MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：研究MAPK通路信號在人早孕絨毛組織中的表達(dá)，探討IGF-1對體外培養(yǎng)的人早孕滋養(yǎng)細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用以及MAPK通路對這些作用的影響，闡明胚胎植入過程中滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)揮生理功能的部分分子機(jī)制。 方法：以妊娠5-7周的正常和自然流產(chǎn)絨毛組織為標(biāo)本，應(yīng)用免疫組化、WesternBlot、圖像分析等方法，檢測MAPK通路信號在人早孕絨毛組織中的表達(dá)部位、表達(dá)水平；以體外培養(yǎng)的人早孕滋養(yǎng)細(xì)胞為標(biāo)本，分別用細(xì)胞ELISA法、MTT法、化學(xué)發(fā)

2、光法以及割傷法觀察IGF-1在滋養(yǎng)細(xì)胞增殖、分化、侵入中的調(diào)節(jié)作用以及MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對這些作用的影響。 結(jié)果：(1)免疫組化結(jié)果顯示：妊娠5-7周正常組絨毛組織中，磷酸化(活化型)ERK在細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞和合體滋養(yǎng)細(xì)胞呈陽性或強(qiáng)陽性染色，以細(xì)胞漿著色為主，而在自然流產(chǎn)組絨毛組織中，呈弱陽性或陰性染色，以合體滋養(yǎng)細(xì)胞胞漿著色為主；磷酸化p-38和磷酸化JNK在正常組絨毛細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞和合體滋養(yǎng)細(xì)胞中均呈陽性染色；而在自然流產(chǎn)組中，

3、二者在細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞呈陽性染色，在合體滋養(yǎng)細(xì)胞則呈陰性染色。(2)WesternBlot結(jié)果顯示：磷酸化ERK在妊娠5-7周正常組和自然流產(chǎn)組絨毛均有表達(dá)，但在正常早孕組中表達(dá)水平明顯高于自然流產(chǎn)組。(3)細(xì)胞ELISA法檢測滋養(yǎng)細(xì)胞中ERK的相對激酶活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同濃度IGF-1均能激活ERK，且在0.1-100nM范圍內(nèi)，隨IGF-1濃度增高，激酶活性增強(qiáng)；ERK通路的特異性阻斷劑U0126可抑制滋養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)ERK激活。(4)MTT

4、法測定滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，IGF-1可促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞增殖，且在0.1-100nM范圍內(nèi)，隨IGF-1濃度增高，滋養(yǎng)細(xì)胞增殖活性增強(qiáng)；U0126可抑制IGF-1對滋養(yǎng)細(xì)胞的促增殖作用。(5)化學(xué)發(fā)光法檢測滋養(yǎng)細(xì)胞HCG含量，結(jié)果表明，IGF-1可促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞分泌HCG，且在0.1-100nM范圍內(nèi)，隨IGF-1濃度增高，滋養(yǎng)細(xì)胞分泌HCG增加；U0126可抑制滋養(yǎng)細(xì)胞中HCG分泌。(6)割傷法測定滋養(yǎng)細(xì)胞的遷移活性，結(jié)果表明，IG