低劑量納曲酮對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞功能調(diào)節(jié)的研究.pdf

1、前言
　　納曲酮是一種非選擇性阿片受體拮抗劑，對(duì)μ-，δ-，κ-阿片受體均有阻斷作用。阿片受體是一類廣泛分布于神經(jīng)系統(tǒng)的膜受體，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)阿片受體亦廣泛分布于免疫細(xì)胞上，其免疫調(diào)節(jié)作用日益受到有關(guān)學(xué)者的關(guān)注。納曲酮于1984年經(jīng)FDA批準(zhǔn)上市，以50mg/d的劑量應(yīng)用于海洛因和阿片成癮治療。近年來(lái)，有關(guān)低劑量納曲酮(4.5mg/d)的研究正在逐漸成為熱點(diǎn)。自1985年起，不同研究者開展的一系列臨床先導(dǎo)性研究表明，低劑量納曲酮對(duì)于諸

2、如克羅恩病、AIDS、某些腫瘤和多發(fā)性硬化癥等免疫相關(guān)疾病有著潛在的治療價(jià)值。巨噬細(xì)胞廣泛存在于機(jī)體組織中，是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，發(fā)揮著廣泛的免疫功能。經(jīng)典激活巨噬細(xì)胞有吞噬殺傷，釋放炎癥介質(zhì)，提呈抗原和調(diào)節(jié)并促進(jìn)Th1型免疫的功能，可分泌較高水平的TNF-α、IL-12，以及合成大量的NO和H2O2，能有效的清除病原體和腫瘤細(xì)胞。腹腔巨噬細(xì)胞多游離存在于腹腔的腹水中，易于獲得，因此進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)時(shí)往往選用小鼠腹腔巨噬細(xì)胞為研究對(duì)象。目前

3、關(guān)于低劑量納曲酮對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞是否存在活化作用，以及不同濃度的低劑量納曲酮對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)是否存在差異這些方面的研究，國(guó)內(nèi)外未見報(bào)道。本研究利用體外培養(yǎng)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，給予不同濃度的低劑量納曲酮刺激，通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等檢測(cè)手段，檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)并做出統(tǒng)計(jì)分析，旨在為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)室和臨床研究提供一些參考。
　　方法
　　所用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為清潔級(jí)6-8周齡雌性BALB/c小鼠，無(wú)菌灌洗提取腹腔巨噬細(xì)胞，貼壁純化培養(yǎng)

4、，鑒定合格后用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。預(yù)實(shí)驗(yàn)通過(guò)比對(duì)各濃度低劑量納曲酮刺激下巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清中NO水平確定低劑量納曲酮作用于小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的適宜濃度和作用時(shí)間;正式實(shí)驗(yàn)在適宜濃度和作用時(shí)間下收集細(xì)胞培養(yǎng)上清，利用一系列試劑盒檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)并做統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果
　　1、無(wú)菌灌洗提取腹腔細(xì)胞，貼壁純化培養(yǎng)，經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色鑒定細(xì)胞存活率＞99％，瑞氏-姬姆薩染色鑒定巨噬細(xì)胞純度＞98％。
　　2、10-8M的低劑量納曲酮處理組96h培

5、養(yǎng)上清中H2O2的含量與空白對(duì)照組比較顯著升高(P＜0.01)。
　　3、10-8M的低劑量納曲酮處理組96h培養(yǎng)上清中NO的含量與空白對(duì)照組比較顯著升高(P＜0.01)。
　　4、10-8M的低劑量納曲酮處理組96h培養(yǎng)上清中TNF-α的含量與空白對(duì)照組比較顯著升高(P＜0.01)。
　　5、10-8M的低劑量納曲酮處理組96h培養(yǎng)上清中IL-12p70的含量與空白對(duì)照組比較顯著升高(P＜0.01)。
　　結(jié)論