高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定血清中游離和結(jié)合型膽汁酸的方法學(xué)研究和臨床應(yīng)用.pdf

1、目的： 1．建立高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS／MS)同時(shí)測(cè)定血清中游離和結(jié)合型膽汁酸的方法。 2．用HPLC—MS／MS法測(cè)定正常孕婦、輕度和重度妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥(intrahepaticcholestasisofpregnancy，ICP)患者血清中膽汁酸，建立ICP的膽汁酸譜，用于ICP的診斷和分度診斷。 方法： 1．色譜條件：色譜柱：WatersAtlantisC18(3．9×150m

2、lil，5pm)；柱溫：25℃；流速：1ml／min，分流比為1：4；流動(dòng)相A：含5mmol／L醋酸銨和0．01％甲酸水溶液，B：含5mmol／L醋酸銨和0．01％甲酸甲醇溶液，梯度洗脫；用三級(jí)四極桿串聯(lián)質(zhì)譜(MS／MS)進(jìn)行檢測(cè)，離子化模式為ESI一，采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式，外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量；檢測(cè)時(shí)間10min。 2．用ChromabondC18ec固相小柱萃取血清樣品。 3．用HPLC—MS／MS法測(cè)定53例

3、正常孕婦，21例輕度ICP患者，22例重度ICP患者的血清膽汁酸。 結(jié)果： 1．膽汁酸的線性范圍為O．10～100．0gmol／L，r為0．9990～0．9999，具有良好的相關(guān)性，最低檢測(cè)限0．00l～0．006gmol／L。該方法的日內(nèi)變異系數(shù)均小于3．O％，日間變異系數(shù)均不超過5．94％，平均回收率為90．0～¨0．0％。 2．與正常孕婦組相比，輕度ICP組GCA和TCA顯著增高，GCDCA極顯著增高，而U

4、DCA顯著降低；重度ICP組TUDCA顯著增高，GCA、GCDCA、TCA和TLCA極顯著增高，而GDCA顯著降低，TCDCA和TDCA極顯著降低。與輕度ICP組相比，重度ICP組TUDCA顯著增高，GCA、GCDCA和TCA極顯著增高。 結(jié)論： 1．本研究建立的血清膽汁酸的HPLC—MS／MS分析法，能實(shí)現(xiàn)血清中微量的游離和結(jié)合型膽汁酸的測(cè)定，該方法準(zhǔn)確、靈敏、快速、特異，適合于實(shí)驗(yàn)室研究和臨床常規(guī)檢測(cè)。 2．