救必應(yīng)對產(chǎn)ESBLs大腸桿菌作用效果及藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、本研究旨在探討救必應(yīng)對產(chǎn)超光譜β內(nèi)酰胺酶(Extended spectrumβ-lactamases，ESBLs)大腸桿菌的抑菌機(jī)理及在動(dòng)物體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究，為救必應(yīng)（鐵冬青、米碎木）的研究和開發(fā)利用提供借鑒。主要研究結(jié)果如下:
　　1、臨床分離菌株的鑒定及基因型檢測:采用雙紙片增效法檢測耐藥菌產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶(Extended spectrumβ-lactmases，ESBLs)情況，并采用PCR擴(kuò)增法確定細(xì)菌產(chǎn)ESBLs基因

2、型。結(jié)果顯示:分離菌為產(chǎn)ESBLs同時(shí)攜帶(Fosfomycin Resistance Gene，fosA3)型耐藥基因大腸桿菌。
　　2、救必應(yīng)水提取物對產(chǎn)ESBLs細(xì)菌的抑菌活性研究:用牛津杯法測定救必應(yīng)水提取物的抑菌活性和平板涂布法測定救必應(yīng)水提取物的殺菌活性，采用96孔反應(yīng)板二倍微量稀釋法分別檢測救必應(yīng)水提取物與抗菌藥的最小抑菌濃度(MIC)，再用微量棋盤稀釋法測定救必應(yīng)水提取物與抗菌藥聯(lián)合作用后的部分抑菌濃度指數(shù)(FIC

3、I)。結(jié)果顯示:救必應(yīng)水提取物的MIC為0.5 g/mL，救必應(yīng)水提取物與阿莫西林、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、痢菌凈、克林沙星、磺胺間甲氧嘧啶、加替沙星、頭孢他啶聯(lián)合應(yīng)用后FICI≤0.5均存在協(xié)同作用，與左旋氧氟沙星、阿米卡星聯(lián)合應(yīng)用后0.5＜FICI≤1.0存在相加作用，研究表明救必應(yīng)水提取物對產(chǎn)ESBLs大腸桿菌有一定的抑菌活性和殺菌活性，其與部分抗菌藥聯(lián)合應(yīng)用后，抗菌藥體外抗菌活性顯著增強(qiáng)。
　　3、救必應(yīng)不同提取物與抗菌藥聯(lián)合

4、對產(chǎn)ESBLs細(xì)菌的抑菌效果:通過制備4種救必應(yīng)提取物，采用96孔反應(yīng)板二倍微量稀釋法體外檢測提取物與抗菌藥聯(lián)合誘導(dǎo)產(chǎn)ESBLs大腸桿菌的抑菌效果。結(jié)果顯示:4種救必應(yīng)提取物與抗菌藥聯(lián)合誘導(dǎo)細(xì)菌傳代對耐藥大腸桿菌有不同程度的抑菌活性，其中正丁醇、乙醇提取物與抗菌藥聯(lián)合抑菌效果明顯。研究表明救必應(yīng)正丁醇、乙醇提取物與抗菌藥聯(lián)合誘導(dǎo)細(xì)菌傳代具有體外抗耐藥菌作用。
　　4、救必應(yīng)中藥血清與抗菌藥聯(lián)合對產(chǎn)ESBLs細(xì)菌的抑菌效果:制備救必

5、應(yīng)中藥血清，采用二倍微量稀釋法體外檢測抗菌藥的最小抑菌濃度(MIC)，然后中藥血清與抗菌藥聯(lián)合誘導(dǎo)產(chǎn)ESBLs細(xì)菌傳代。結(jié)果顯示:救必應(yīng)中藥血清與抗菌藥聯(lián)合誘導(dǎo)細(xì)菌傳代對產(chǎn)ESBLs大腸桿菌有不同程度的抑菌活性。研究表明救必應(yīng)中藥血清可明顯地增強(qiáng)β-內(nèi)酰胺類、喹諾酮類、氨基糖苷類和喹噁啉類抗菌藥對耐藥菌的抑制作用。
　　5、救必應(yīng)水提取物對產(chǎn)ESBLs細(xì)菌的抑菌機(jī)理研究:通過觀察細(xì)菌超微結(jié)構(gòu)、細(xì)胞壁和細(xì)胞膜通透性變化試驗(yàn)、核酸合成

6、抑制試驗(yàn)、蛋白質(zhì)合成抑制試驗(yàn)、SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳試驗(yàn)，研究救必應(yīng)水提取物的抑菌機(jī)理。結(jié)果顯示:與不添加提取物的對照組相比，救必應(yīng)水提取物使細(xì)菌破損嚴(yán)重，細(xì)胞壁和細(xì)胞膜通透性增加，細(xì)胞質(zhì)外滲，菌液中AKP含量、可溶性蛋白含量增多、總蛋白含量下降、菌液中紫外吸收物增加、大腸桿菌DNA熒光強(qiáng)度明顯減弱。研究表明救必應(yīng)水提取物的抑菌機(jī)理是通過影響細(xì)菌超微結(jié)構(gòu)，細(xì)菌細(xì)胞壁和細(xì)胞膜通透性的變化，抑制細(xì)菌核酸的合成和細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成實(shí)現(xiàn)的。<

7、br>　　6、救必應(yīng)在動(dòng)物體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究:建立雞血漿中紫丁香苷的高效液相色譜法分析方法，對其灌胃給藥在雞體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)過程進(jìn)行研究。結(jié)果顯示紫丁香苷在雞體內(nèi)的血藥濃度，在0.50～30.00μg/mL范圍內(nèi)，濃度對峰面積的線性關(guān)系良好，R2=0.9997。藥動(dòng)學(xué)參數(shù):藥時(shí)面積AUC為572.775 h·ug/mL，半衰期t1/2λ為16.75 h，最高血藥濃度Cmax為32.571ug/mL。研究表明紫丁香苷在雞體內(nèi)血藥濃度符合非