淋巴瘤患者T細(xì)胞亞群及T細(xì)胞受體的研究.pdf

1、研究背景: 許多研究表明，淋巴瘤患者的免疫功能低下，機體的免疫受抑在淋巴瘤的發(fā)生與發(fā)展中起重要作用。T淋巴細(xì)胞亞群分CD4<'+>輔助亞群和CD8<'+>抑制亞群。而CD3<'+>表面標(biāo)志存在于所有T細(xì)胞表面，可反映CD4<'+>和CD8<'+>T細(xì)胞的總體水平。在正常情況下，CD4<'+>/CD8<'+>比值基本恒定，以維持體內(nèi)環(huán)境的平衡。惡性腫瘤細(xì)胞可產(chǎn)生一些細(xì)胞免疫抑制因子，可在不同程度上抑制CD8<'+>和CD4<'+>

2、細(xì)胞的增殖和功能，從而導(dǎo)致CD4<'+>/CD8<'+>細(xì)胞比值失衡和免疫功能紊亂。目前研究認(rèn)為，僅從T細(xì)胞亞群上分析腫瘤患者的T細(xì)胞免疫功能狀況是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，需要進(jìn)一步的深入研究，如分析T細(xì)胞各亞家族分布和T細(xì)胞克隆性等，才能更為全面了解腫瘤患者的免疫功能狀況。而對于T細(xì)胞亞家族的分析，需要借助于T細(xì)胞表面所表達(dá)的T細(xì)胞受體(TCR)的基因分析。T細(xì)胞發(fā)育過程中，TCR發(fā)生重排，形成一高度可變區(qū)(VN(DN)J區(qū))，稱為互補決定區(qū)3(

3、CDR3)，不同重排(不同克隆)時，其CDR3長度不同，利用這一特點，通過檢測29個TCR Vα或24個TCR V β亞家族的CDR3長度，可以了解機體T細(xì)胞不同亞家族的分布及其克隆性。 為了解淋巴瘤患者治療前后的免疫狀況，探討其與淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后及可能存在的淋巴瘤細(xì)胞相關(guān)抗原的關(guān)系，本研究分析了淋巴瘤患者T細(xì)胞亞群的變化及6例彌漫大B細(xì)胞型非霍奇金淋巴瘤患者外周血TCR Vα、Vβ克隆增生性T細(xì)胞的特點和CDR3序列的

4、測定分析。 研究內(nèi)容與方法:采用FCM(流式細(xì)胞儀法)檢測淋巴瘤、其它類型惡性腫瘤及正常人外周血T細(xì)胞亞群的變化。用統(tǒng)計軟件SPSS11.5對其進(jìn)行分析。用RT-PCR-基因掃描法檢測其中6例非霍奇金淋巴瘤(彌漫大B型，DLBL)患者外周血TCR Vα、Vβ T細(xì)胞克隆性增生特點。選取經(jīng)基因掃描分析發(fā)現(xiàn)的部分呈寡克隆接近單克隆的產(chǎn)物進(jìn)一步行序列分析，了解其CDR3的序列。 結(jié)果:1．與正常對照組相比，淋巴瘤患者免疫功能低

5、下，表現(xiàn)為CD3<'+>細(xì)胞、CD4<'+>細(xì)胞百分率不同程度下降而CD8<'+>細(xì)胞百分率不同程度上升；淋巴瘤治療前后與其它類型惡性腫瘤相比，T細(xì)胞亞群出現(xiàn)明顯差異。 2．6例彌漫大B細(xì)胞性淋巴瘤患者分別表達(dá)23-27個TCR V α亞家族、10-20個TCR Vβ亞家族。6例病人均存在1個或以上的多個Vα和、Vβ亞家族的克隆增殖T細(xì)胞，增殖形式包括寡克隆、寡克隆增殖趨勢及雙克隆。其中，Vα6、Vα23、Vβ3、Vβ13和V

6、β 15亞家族出現(xiàn)克隆增殖性T細(xì)胞的頻率較高(均見于4/6例病人中)。同時，分析了7個呈寡克隆性增殖Vα和Vβ的PCR產(chǎn)物，分別獲得2個Vα6、2個Vα23、1個Vβ3和2個Vβ13的基因序列，明確其CDR3序列。 結(jié)論: 1．淋巴瘤患者的免疫功能低下；監(jiān)測淋巴瘤患者T細(xì)胞亞群的變化，一定程度上反映了患者體內(nèi)免疫功能和治療效果。 2．DLBL病人外周血TCR V α、Vβ亞家族T細(xì)胞存在傾斜性分布和克隆性增殖，這