黃芪多糖對糖尿病足潰瘍成纖維細胞生物學特性的影響.pdf

1、目的： 成纖維細胞(Fbs)是參與創(chuàng)面愈合的主要細胞，可合成、分泌膠原蛋白、糖胺多糖等細胞外基質和多種細胞因子。研究表明，在糖尿病難愈性創(chuàng)面中，F(xiàn)bs增殖能力較正常皮膚和糖尿病急性創(chuàng)面有很大削弱。故提高Fbs的增殖能力可能是加速創(chuàng)面愈合的重要方法。 糖尿病足潰瘍在中醫(yī)學屬脫疽范圍，黃芪具有托毒排膿，生肌止血，促進壞死細胞重新生長的作用。臨床研究證實中藥黃芪可以促進糖尿病足潰瘍創(chuàng)面愈合，但其機制不清楚。 本研究利用

2、黃芪多糖(APs)干預體外培養(yǎng)的糖尿病足潰瘍Fbs，觀察黃芪多糖對體外培養(yǎng)的糖尿病足潰瘍Fbs數(shù)量、形態(tài)及分泌增殖功能、細胞衰老的影響，從細胞的角度來探討黃芪多糖促進潰瘍創(chuàng)面愈合的機制。 方法: 1．糖尿病足病截肢患者10例，均符合1999年WHO糖尿病診斷標準，其中男性6例女性4例，年齡57±8.2歲，其空腹血糖(FBG)9.4±1.6mmol/L，餐后2小時血糖(P2BG)14.2±2.4mmol/L，糖化血紅蛋白(

3、HbA<,1c>)9.1±1.0％，糖尿病足潰瘍病程超過4周，排除下肢靜脈性潰瘍。按Wagner分級法在Ⅲ級6例，Ⅳ級4例。標本取材于患者潰瘍邊緣及截肢最遠端組織。正常對照者10例，取自年齡、性別等與前兩組基本相匹配的非糖尿病外傷及骨科截肢患者的手術切口，無系統(tǒng)性硬化病、腎病等疾病的病例。 2．取材后用組織塊法培養(yǎng)Fbs，經(jīng)免疫組化抗波形蛋白和抗角蛋白染色，證實為Fbs。4-6代細胞用于實驗。 3．加入不同濃度的黃芪多糖(分別為

4、2.5ug/ml、10ug/ml、40ug/ml、160ug/ml、640ug/ml)培養(yǎng)以觀察量效關系，其中160ug/ml分別培養(yǎng)0-7天以觀察時效關系。 4．利用MTT比色試驗評價糖尿病足潰瘍Fbs的增殖能力。 5．通過羥脯氨酸測定了解糖尿病足潰瘍Fbs的膠原分泌功能。 6．利用β-半乳糖苷酶染色陽性率評價糖尿病足潰瘍Fbs的老化情況。 7．TRAP-PCR測定糖尿病足潰瘍Fbs端粒酶活性。

5、 結果: 1．Fbs的鑒定：培養(yǎng)的Fbs 6小時貼壁，呈多角形、長梭形，免疫組化鑒定結果顯示：波形蛋白表達陽性，角蛋白表達陰性。 2．不同濃度的APs于預48小時后增加或減少Fbs的數(shù)量。 3．不同濃度的黃芪多糖于預48小時后促進或抑制Fbs的增殖能力。 4．不同濃度的黃芪多糖干預48d,時后增加或降低Fbs的膠原分泌功能。 5．不同濃度黃芪多糖對Fbs衰老情況的影響：根據(jù)MTT法檢測成纖維細胞增

6、殖的結果，得出黃芪多糖的最佳作用濃度及時間，由于β-半乳糖苷酶(SA-B-Gal)染色陽性率隨細胞代齡增加而增加，本實驗儀檢測黃芪多糖160ug/ml組濃度、第4-8代成纖維細胞(P<,4-8>)SA-β-Gal酶染色陽性率。對照組、DFUs近端+APs160ug/ml組、DFUs遠端組、正常人組第6天成纖維細胞SA-β-Gal染色陽性率分別為(65±2)％、(45±3)％、(44±2)％、(5±1)％，對照組、DFUs遠端組、DFUs

7、近端+APs組成纖維細胞SA-β-Gal染色陽性率明顯高于正常人；對照組成纖維細胞SA-β-Gal染色陽性率高于DFUs近端+APs組；DFUs遠端成纖維細胞Fbs SA-β-Gal染色陽性率略低于DFUs近端+APs組，差異無統(tǒng)計學意義。 6．糖尿病足潰瘍Fbs端粒酶表達陰性結論糖尿病足潰瘍處成纖維細胞增殖能力、膠原合成能力減退，細胞衰老：黃芪多糖在10ug/ml-160ug/ml濃度范圍內能增加體外培養(yǎng)的糖尿病足潰瘍成纖維細