MAD2B在腎小管間質(zhì)纖維化發(fā)病機(jī)理中的作用及機(jī)制.pdf

1、目的：通過體內(nèi)實驗來探討MAD2B在腎小管間質(zhì)纖維化過程中的作用。
　　方法：在體內(nèi)實驗中探討MAD2B在腎間質(zhì)纖維化的表達(dá)情況，應(yīng)用單側(cè)輸尿管梗阻模型，將小鼠分為4組（n=5）：假手術(shù)組、1天末模型組、3天末模型組、7天末模型組。用Masson染色以及免疫組化檢測假手術(shù)組和UUO不同時間點(diǎn)（1d，3d，7d）α-SMA、FN的表達(dá)部位以及表達(dá)量來驗證造模成功與否；通過western blot檢測假手術(shù)組和UUO不同時間點(diǎn)（1d，

2、3d，7d）MAD2B蛋白表達(dá)情況；用免疫組化檢測假手術(shù)組和UUO不同時間點(diǎn)（1d，3d，7d）Cdh1和MAD2B蛋白的表達(dá)情況；通過western blot檢測假手術(shù)組和UUO不同時間點(diǎn)（3d，7d）APC/C底物cyclinB1、snon、skp2的表達(dá)量；選擇造模第7天作為時間點(diǎn)，采用慢病毒轉(zhuǎn)染shRNA抑制MAD2B基因表達(dá)，將轉(zhuǎn)染后的小鼠分為4組（n=5）：Sham+ScrambledsRNA組、Sham+MAD2B-shR

3、NA組、UUO+Scrambled sRNA組、UUO+MAD2B-shRNA組。做冰凍切片直接觀察轉(zhuǎn)染效率。用western blot檢測MAD2B抑制后的表達(dá)，并檢測APC/C復(fù)合物調(diào)節(jié)分子Cdh1，底物cyclinB1、snon、skp2的表達(dá)。用免疫組化的方法檢測α-SMA、FN的表達(dá)。用Masson染色評價腎臟纖維化的程度。
　　結(jié)果：用Masson染色結(jié)果以及用免疫組化的方法檢測α-SMA、FN的表達(dá)驗證UUO模型造模

4、成功；MAD2B在腎纖維化模型中隨著造模時間的增加表達(dá)上調(diào)，在UUO手術(shù)后第7天時表達(dá)最高，并且導(dǎo)致了APC/C通路分子表達(dá)變化，Cdh1、snon表達(dá)下調(diào)；而skp2、cyclinB1表達(dá)上調(diào)；采用慢病毒轉(zhuǎn)染動物模型敲低MAD2B后，APC/C調(diào)節(jié)分子Cdh1表達(dá)上調(diào)，相關(guān)底物cyclinB1表達(dá)下調(diào)，腎間質(zhì)纖維化相關(guān)蛋白α-SMA、FN表達(dá)減少，腎臟纖維化程度減輕。
　　結(jié)論：在UUO模型中MAD2B表達(dá)升高，可導(dǎo)致APC/C