腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)病生理過程的原子力顯微術(shù)研究.pdf

1、在腦損傷相關(guān)疾病的研究中，研究腦損傷導(dǎo)致的血腦屏障結(jié)構(gòu)和生理功能的變化，將有助于我們了解相關(guān)病癥的致病機制，并對治療藥物的藥效進行評估。作為一種高分辨的檢測手段，原子力顯微術(shù)(AFM)能夠在最接近生理環(huán)境的狀態(tài)下，獲得細(xì)胞等生物樣本的的高分辨三維形貌圖信息，以及其對生物樣本機械性質(zhì)的定量檢測的能力，有望廣泛應(yīng)用于生物學(xué)研究的各個方向。建立一個有效的體外血腦屏障細(xì)胞模型，并把AFM引入血腦屏障結(jié)構(gòu)和生理功能的研究，必將使我們在相關(guān)病理研究

2、中獲得新的認(rèn)識。
　　 本文建立了具有緊密聯(lián)合結(jié)構(gòu)特點的大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(rCMECs)體外培養(yǎng)模型，并進行了腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)病生理過程的原子力顯微術(shù)研究。以大鼠腦皮質(zhì)微血管段過濾法為基礎(chǔ)構(gòu)建了適合AFM檢測的緊密聯(lián)合的rCMECs細(xì)胞模型，并使用AFM對rCMECs細(xì)胞進行形態(tài)學(xué)和機械學(xué)的表征。利用建立好的細(xì)胞模型，通過無血清培養(yǎng)和H202刺激處理模擬了體內(nèi)血腦屏障內(nèi)皮細(xì)胞的受損過程；并且將AFM檢測細(xì)胞表面形態(tài)特征、

3、熒光顯微術(shù)觀察藥物分子在細(xì)胞中的定位和細(xì)胞骨架變化以及細(xì)胞凋亡的檢測相結(jié)合，較為全面地評估了C60(C(COOH)2)2對rCMECs細(xì)胞的作用。研究發(fā)現(xiàn)，受損細(xì)胞表面會產(chǎn)生大量的囊泡結(jié)構(gòu)，而這些結(jié)構(gòu)很可能導(dǎo)致細(xì)胞層通透性的增大；C60(C(COOH)2)2能夠選擇性的進入氧化損傷的rCMECs細(xì)胞，抑制細(xì)胞凋亡和促進細(xì)胞骨架蛋白修復(fù)。通過修飾特異性識別AFM探針，對rCMECs表達的黏附相關(guān)因子進行識別檢測。本文建立的適合AFM檢測的