免疫負(fù)調(diào)控分子TIPE2在慢性HBV感染患者中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、本文主要從以下幾方面進(jìn)行了論述：
　　第一部分:免疫負(fù)調(diào)控分子TIPE2在慢性乙型肝炎、肝硬化和原發(fā)性肝癌患者中的表達(dá)規(guī)律研究
　　研究目的：
　　探討慢性乙型肝炎、肝硬化和肝細(xì)胞癌患者外周單個核細(xì)胞中TIPE2mRNA的表達(dá)規(guī)律，以及其TIPE2 mRNA與臨床指標(biāo)的相關(guān)性。
　　研究方法:
　　本研究采用橫斷面研究設(shè)計(jì)，采用隨機(jī)的方法納入慢性HBV感染患者193例，其中慢性乙型肝炎患者97例，肝硬化患者

2、55例，肝細(xì)胞癌患者41例，均為2013年12月至2014年5月間在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院肝病科住院或門診患者。此外，選擇14例成年健康志愿者作為正常對照。應(yīng)用實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-time Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)方法檢測所有患者及健康對照外周血單個核細(xì)胞(Peripheral Blood Mononuclear Cells，PBMCs)中TIPE2mRNA表達(dá)水平。
　　研究

3、結(jié)果:
　　1.慢性乙型肝炎患者和肝硬化患者外周血單個核細(xì)胞TIPE2 mRNA表達(dá)水平明顯高于健康對照組（均P＜0.05）。與肝硬化患者相比，慢性乙型肝炎患者外周血單個核細(xì)胞TIPE2 mRNA表達(dá)水平無明顯差異（P＞0.05）。肝細(xì)胞癌患者外周血單個核細(xì)胞TIPE2 mRNA表達(dá)水平明顯低于健康對照組（P＜0.01）。
　　2.在慢性乙型肝炎患者，HBVDNA陽性患者外周血單個核細(xì)胞TIPE2 mRNA表達(dá)水平明顯高于H

4、BVDNA陰性患者(P＜0.05)。Spearman秩和相關(guān)分析結(jié)果表明，慢性乙型肝炎患者外周血單個核細(xì)胞中TIPE2 mRNA表達(dá)水平與血清ALT水平、血清AST水平和血清PTA水平均呈明顯正相關(guān)(r=0.262，P＜0.05; r=0.292，P＜0.05; r=0.207，P＜0.05)，而年齡、白蛋白、膽紅素、凝血酶原時間、乙肝病毒載量與TIPE2 mRNA表達(dá)水平無明顯相關(guān)（均P＞0.05）。
　　3.在乙肝肝硬化患者，

5、代償期患者外周血單個核細(xì)胞TIPE2 mRNA表達(dá)水平明顯低于失代償期患者(P＜0.05)，腹水陽性患者外周血單個核細(xì)胞中TIPE2mRNA表達(dá)水平明顯高于腹水陰性患者(P＜0.05)。肝硬化患者外周血單個核細(xì)胞中TIPE2 mRNA表達(dá)水平與膽紅素和MELD積分呈明顯正相關(guān)(r=0.288,P＜0.05;r=0.366,P＜0.01)。
　　4.在肝細(xì)胞癌患者，外周血單個核細(xì)胞TIPE2 mRNA的表達(dá)水平與是否有血管浸潤、腫瘤

6、大小以及TNM分期有顯著相關(guān)性，且與AFP呈明顯負(fù)相關(guān)(r=0.312，P＜0.05)。
　　研究結(jié)論:
　　慢性乙型肝炎患者和肝硬化患者外周血單個核細(xì)胞TIPE2 mRNA表達(dá)水平比健康對照組明顯升高，而肝細(xì)胞癌患者TIPE2 mRNA表達(dá)水平比健康對照組明顯降低。TIPE2 mRNA表達(dá)與慢性乙型肝炎患者肝臟損傷、肝硬化病情輕重明顯相關(guān)，而與肝細(xì)胞癌的腫瘤分期也密切相關(guān)。這些結(jié)果表明，TIPE2基因參與慢性HBV感染的不

7、同進(jìn)程，在不同的疾病狀態(tài)可能具有不同的生物學(xué)作用。
　　第二部分:免疫負(fù)調(diào)控分子TIPE2在慢性乙型肝炎臨床免疫分期中的表達(dá)研究
　　研究目的:
　　1.探討慢性乙型肝炎不同臨床免疫分期患者外周血單個核細(xì)胞內(nèi)TIPE2及其相關(guān)炎癥因子包括白介素(Interleukin，IL)-6、IL-10、干擾素（Interferon，IFN）-γ和腫瘤壞死因子(Tumor necrosis factor，TNF)-α基因表達(dá)水平的

8、變化規(guī)律。
　　2.探討在慢性乙型肝炎患者肝組織中TIPE2蛋白的表達(dá)情況。
　　研究方法:
　　本研究采用回顧性方法共納入205例慢性乙型肝炎患者，包括免疫耐受期患者40例，免疫清除期患者100例，低復(fù)制期患者28例和再活動期患者37例，15例健康志愿者作為正常對照。我們采用實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-time Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)方法檢測慢性乙型肝炎患者和健康

9、對照組外周血單個核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)中TIPE2、IL-6、IL-10、IFN-γ和TNF-α基因表達(dá)水平。另外，我們還收集了25例行經(jīng)皮肝穿刺活檢的慢性乙型肝炎患者及5例健康肝移植供者的肝組織標(biāo)本，采用免疫組織化學(xué)方法檢測TIPE2在肝組織內(nèi)的表達(dá)情況。
　　研究結(jié)果:
　　1.慢性乙型肝炎患者外周血單個核細(xì)胞TIPE2 mRNA表達(dá)水平比健康對照組明顯

10、升高（P＜0.05），IL-6、IL-10和TNF-αmRNA表達(dá)水平較健康對照者明顯升高，而IFN-γmRNA水平與健康對照組無明顯差異（P＞0.05）。
　　2.免疫清除期患者外周血單個核細(xì)胞TIPE2 mRNA表達(dá)水平明顯高于再活動期患者(P＜0.05)，低復(fù)制期患者TIPE2 mRNA表達(dá)水平明顯高于免疫耐受期患者（P＜0.05）。再活動期患者TIPE2 mRNA表達(dá)水平與免疫清除期患者相比，無顯著性差異(P＞0.05)，

11、低復(fù)制期患者TIPE2 mRNA表達(dá)水平和免疫耐受期組相比較無明顯差異(P＞0.05)。
　　3.免疫清除期患者外周血單個核細(xì)胞IL-10 mRNA表達(dá)水平明顯高于低復(fù)制期患者（P＜0.05），免疫清除期患者IL-10 mRNA表達(dá)水平與免疫耐受期患者相比較明顯升高（P＜0.05）。同時，免疫耐受期患者外周血單個核細(xì)胞IL-10mRNA表達(dá)水平明顯低于再活動期患者(P＜0.05）。Kruskal-Wallis分析提示外周血單個核細(xì)

12、胞IL-6、TNF-α和IFN-γ mRNA表達(dá)水平在慢性乙型肝炎不同臨床免疫分期中無明顯差別。
　　研究結(jié)論:
　　慢性乙型肝炎免疫清除期和再活動期患者患者外周血單個核細(xì)胞TIPE2mRNA水平明顯升高，TIPE2 mRNA表達(dá)水平與疾病免疫分期和炎癥程度密切相關(guān)。TIPE2蛋白主要在肝細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)表達(dá)，與肝組織炎癥程度和纖維化分期密切相關(guān)。綜上所述，TIPE2在慢性乙型肝炎患者的自然病史中發(fā)揮重要作用。
　　第三部分

13、:外周血單個核細(xì)胞TIPE2 mRNA作為分子標(biāo)志物評估慢加急性乙型肝炎肝衰竭預(yù)后的診斷價值研究
　　研究目的:
　　1.進(jìn)一步探討慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者外周血單個核細(xì)胞中TIPE2 mRNA的表達(dá)規(guī)律，以及TIPE2 mRNA與慢加急性乙型肝炎肝衰竭病情嚴(yán)重程度關(guān)系;
　　2.評估外周血單個核細(xì)胞TIPE2 mRNA作為分子標(biāo)志物評估慢加急性肝衰竭臨床預(yù)后的診斷價值
　　研究方法:
　　本研究采用前瞻

14、性研究方法共納入171例慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者，為2009年3月至2014年12月在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院肝病科住院患者。根據(jù)時間序列不同，將171例慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者分為兩組:2009年3月至2013年5月就診的108例患者作為模型組;2013年6月至2014年12月就診的63例患者作為驗(yàn)證組。本研究還納入22例健康對照和42例慢性乙型肝炎患者作為臨床對照。我們首先通過密度梯度離心法提取研究對象外周血單個核細(xì)胞，Trizol提取

15、總RNA，采用RT-PCR法檢測外周血單個核細(xì)胞中TIPE2 mRNA的表達(dá)水平。首先采用單因素分析確定臨床指標(biāo)與肝衰竭預(yù)后的相關(guān)關(guān)系，取單因素分析P值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的臨床指標(biāo)納入多因素COX比例風(fēng)險模型，用于鑒定影響慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者臨床預(yù)后的獨(dú)立危險因素。采用受試者工作特征曲線評估模型組和驗(yàn)證組外周血單個核細(xì)胞TIPE2 mRNA和MELD積分預(yù)測慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者預(yù)后的診斷價值。
　　研究結(jié)果:
　　1

16、.我們對ACHBLF患者進(jìn)行了6個月的隨訪，由于在隨訪的4個月到6個月期間無患者死亡，因此我們采用3個月生存率評價慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者預(yù)后。慢加急性肝衰竭患者3個月死亡率為62％，常見并發(fā)癥肝硬化、肝性腦病、腹水和自發(fā)性腹膜炎各占為59例(54.6％)，39例(36.1％)，50例(46.3％)和40例(37％)。
　　2.模型組慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者TIPE2 mRNA表達(dá)水平明顯高于慢性乙型肝炎患者(P＜0.001)

17、和健康對照組(P＜0.001)。在慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者中，死亡組外周血單個核細(xì)胞TIPE2mRNA表達(dá)水平明顯高于存活組患者(P＜0.001)。Spearman秩和相關(guān)分析結(jié)果表明，TIPE2 mRNA表達(dá)水平與MELD積分、HBsAg呈明顯正相關(guān)（r=0.544，P＜0.001;r=0.229，P＜0.05）;與PLT呈明顯負(fù)相關(guān)（r=-0.262，P＜0.05）。
　　研究結(jié)論:
　　外周血單個核細(xì)胞TIPE2 m