TIPE2在哮喘兒童外周血單個核細胞中的表達及意義.pdf

1、目的:
　　兒童哮喘是一種小氣道的慢性炎癥，有多種細胞發(fā)揮了重要作用，尤其是T淋巴細胞、嗜堿粒細胞、嗜酸性粒細胞、巨噬細胞、中性粒細胞及上皮細胞等。氣道炎癥導致氣流受阻、支氣管高反應性并誘發(fā)多種反復出現(xiàn)的癥狀。氣道炎癥的發(fā)展和調節(jié)與Th2細胞因子升高和Th1細胞因子降低密切相關。Th2細胞因子升高導致IgE過度產生，嗜酸性粒細胞分化與氣道高反應性持續(xù)發(fā)展。然而Th1細胞因子可以對抗Th2細胞因子的作用，因此哮喘的氣道炎癥可能是Th

2、細胞失去正常平衡的結果，Th1/Th2平衡在哮喘的病理生理過程中扮演關鍵性的角色。
　　TIPE2是一種新型的負性免疫調節(jié)蛋白，已有研究證實其在機體固有免疫和適應性免疫反應中均發(fā)揮重要的負性調節(jié)作用。有報道顯示，系統(tǒng)性紅斑狼瘡與慢性乙型肝炎患者的外周血單個核細胞中以及在糖尿病患者的腎活檢組織中存在TIPE2的異常表達，這些結果表明TIPE2可能與一些慢性炎癥性疾病的發(fā)展有相關性。然而，TIPE2在兒童哮喘患者中的表達情況及其意義目

3、前尚未見報道。本研究擬通過檢測兒童哮喘患者外周血單個核細胞中TIPE2的表達，同時檢測外周血中嗜酸性粒細胞的數(shù)目以及血清中IgE含量、Th1型細胞因子IFN-γ與Th2型細胞因子IL-4水平，并分析它們之間的相關性，了解TIPE2在哮喘發(fā)病過程中的作用，以探討哮喘發(fā)病起始階段的干預機制。
　　方法:
　　2011年至2012年隨機抽取在山東大學齊魯兒童醫(yī)院就診的42名哮喘兒童為研究對象，診斷標準參考2008年中華醫(yī)學會兒童分

4、會呼吸學組修訂的兒童哮喘防治常規(guī)診斷標準。健康對照組隨機抽取同時期39名來自山東大學齊魯兒童醫(yī)院入托查體兒童，排除哮喘、其他過敏疾病及近期呼吸道疾病。
　　1.采用RT-PCR、qRT-PCR及westernblot法檢測哮喘患者與正常對照組外周血單個核細胞中TIPE2的表達水平;
　　2.采用酶聯(lián)免疫雙抗體夾心法（即夾心ELISA法）檢測哮喘患者與正常對照組血清中IL-4、IFN-γ含量;
　　3.采用全自動特定蛋白

5、分析儀檢測哮喘患者與正常對照組血清中總IgE含量;
　　4.采用全自動血細胞分析儀對哮喘患者及正常對照組全血中嗜酸性粒細胞數(shù)量進行檢測。
　　5.所有數(shù)據以平均值±均數(shù)標準誤(mean±SEM)的形式表示，利用t檢驗比較哮喘患者與正常對照組之間的差異，采用Pearson's相關性檢驗分析的方法進行相關性分析，以P＜0.05為統(tǒng)計學有顯著性的意義。
　　結果:
　　1.外周血單個核細胞中TIPE2mRNA的表達:半

6、定量RT-PCR顯示哮喘兒童組TIPE2mRNA表達水平較正常對照組低;實時熒光定量PCR結果為，哮喘組為56.41±34.45，對照組為66.63±37.84，哮喘兒童組TIPE2mRNA的表達水平顯著降低(P=0.0323)。
　　2.外周血單個核細胞中TIPE2蛋白的表達:Westernblot對42名哮喘兒童與39名健康對照兒童外周血TIPE2蛋白表達水平進行分析，發(fā)現(xiàn)哮喘兒童TIPE2蛋白表達水平比正常對照組低，與TIP

7、E2mRNA水平變化一致。
　　3.血清IFN-γ水平檢測:哮喘組為150.64±123.019pg/ml，對照組為404.83±405.20pg/ml，哮喘兒童血清IFN-γ水平顯著降低(P＜0.001)。
　　4.血清IL-4水平檢測:哮喘組IL-4為2.30±4.65pg/ml，對照組IL-4為0.37±0.70pg/ml，哮喘兒童血清中IL-4水平顯著增高(P＜0.001)。
　　5.血清中總IgE含量:哮喘組

8、為388.87±364.51U/ml，對照組為20.61±4.84U/ml，哮喘兒童血清總IgE含量明顯增高(P＜0.001)。
　　6.外周血嗜酸性粒細胞計數(shù):哮喘組為0.30±0.26×109/L，對照組為0.16±0.09×109/L，哮喘兒童外周血嗜酸性粒細胞數(shù)量顯著增高(P=0.0017)。
　　7.相關性分析:TIPE2mRNA的表達與血清IL-4(r=0.3693，P=0.0344)，血清總IgE（r=_0.5

9、173，P=0.001）及嗜酸性粒細胞計數(shù)(r=0.3503，P=0.0362)呈負相關。然而，在TIPE2mRNA表達與血清IFN-γ之間(r=0.1504，P=0.3959)無明顯相關性。
　　結論:
　　1.哮喘兒童外周血嗜酸性粒細胞、血清總IgE、血清IL-4水平顯著增高，而IFN-γ水平則顯著降低，這表明在哮喘兒童中Th2功能占據優(yōu)勢。
　　2.與健康兒童相比，哮喘患兒外周血單個核細胞TIPE2mRNA及蛋白