TIMP-1短發(fā)夾式RNA體內基因轉導及來氟米特對大鼠糖尿病腎病的影響.pdf

1、目的： 觀察TIMP-1短發(fā)夾式RNA(TIMP-1 shRNA)及來氟米特(leflunomide，LEF)對糖尿病腎病大鼠腎間質纖維化的影響 方法： 將雄性Wistar大鼠120只隨機分為6組：正常對照組(N組)、糖尿病組(DM組)、糖尿病TIMP-1 shRNA轉染組(DM-RNAi組)、糖尿病HKshRNA轉染組(DM-VE組)、糖尿病來氟米特治療組(DM-LEF組)、糖尿病羧甲基纖維素組(DM-CMC組

2、)。觀察各組大鼠腎功能變化：PAS染色觀察大鼠腎間質病理形態(tài)改變；RT-PCR方法檢測大鼠腎組織中TIMP-1、MCP-1、ICAM-1、VCAM-1、TGF-β1、Fractalkine和RANTES mRNA各時間點基因水平的變化；Western Blot方法檢測大鼠腎組織中TIMP-1、MMP-2、MMP-9、TGF-β1、MCP-1、ICAM-1、Fractalkine各組蛋白水平的變化，以及免疫組化檢測大鼠腎臟FN、TIMP-

3、1、MMP-2、NF-kB、TGF-β1、MCP-1、α-SMA的表達。 結果： 隨時間延長，糖尿病大鼠的腎臟功能逐漸受累，DM組尿蛋白/尿肌酐，血肌酐，血尿素氮以及相對腎重(KW/BW)與N組比較均顯著升高(P<0.05)，DM-RNAi組，DM-LEF組與DM組比較表達下調(P<0.05)。腎組織病理PAS染色可見DM組腎臟呈進行性腎間質纖維化改變，包括腎小管的萎縮、擴張、炎細胞浸潤等；而DM-RNAi組和DM-LE

4、F組腎組織病變明顯減輕。基因水平檢測TIMP-1在10、12、14、16周表達，隨時間延長，與N組比較DM組表達升高(P<0.05)，DM-RNAi組和DM-LEF組抑制TIMP-1表達(P<0.05)。RT-PCR檢測MCP-1、ICAM-1、VCAM-1、TGF-β1、Fractalkine和RANTES mRNA的表達，可見DM組表達升高(P<0.05)，DM-RNAi組和DM-LEF組表達下調(P<0.05)。同時，TIMP-1

5、蛋白表達與基因水平表達一致；DM組MMP-2、MMP-9隨時間延長蛋白表達降低(P<0.05)，而DM-RNAi組和DM-LEF組表達上調(P<0.05)；DM組TGF-β1、MCP-1、ICAM-1、Fractalkine表達升高(P<0.05)，DM-RNAi組和DM-LEF組表達下調(P<0.05)。免疫組化示DM組TIMP-1、FN、α-SMA、NF-KB、TGF-β1、MCP-1陽性染色表達面積增多(P<0．05)，DM-RN

6、Ai組和DM-LEF組明顯比DM組減少(P<0.05)。 結論： 1．TIMP-1在糖尿病腎病大鼠腎臟中的高表達對糖尿病腎病間質纖維化的發(fā)生發(fā)展起到重要作用。 2．TIMP-1shRNA在基因水平阻斷TIMP-1表達，促進細胞外基質(extracellular material，ECM)降解增加改善腎間質纖維化；此外，TIMP-1shRNA可能通過抑制炎癥反應改善腎小管間質損傷，對糖尿病大鼠腎臟起到保護作用。