慢病毒介導(dǎo)的骨橋蛋白R(shí)NA干擾對(duì)人U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)生長(zhǎng)的影響.pdf

1、目的：研究慢病毒介導(dǎo)的骨橋蛋白R(shí)NA干擾對(duì)人U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)生長(zhǎng)的影響并探討其對(duì)膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)、侵襲的可能機(jī)制，為膠質(zhì)瘤的基因治療提供新的靶點(diǎn)。
　　 方法：應(yīng)用RNA干擾技術(shù)，將已成功構(gòu)建的針對(duì)人OPN基因的慢病毒干擾載體LV-OPNshRNA及對(duì)照組空載體LV-N-OPN分別感染U251細(xì)胞。將未感染組U251細(xì)胞、空載體感染組U251細(xì)胞(LV-N-OPN/U251)、LV-OPNshRNA慢病毒感染組U251細(xì)胞

2、(LV-OPNshRNA/U251)分別接種于裸鼠皮下，建立裸鼠荷瘤模型。每天觀察裸鼠活動(dòng)情況及皮下移植瘤的生長(zhǎng)，每3天測(cè)量皮下腫瘤大小。三周后斷頸處死裸鼠，測(cè)量腫瘤的體積、瘤重。蘇木素-伊紅染色觀察腫瘤組織病理形態(tài)學(xué)變化；半定量RT-PCR法和Western blot法分別檢測(cè)OPN及相關(guān)分子uPA、MMP-2、MMP-9的mRNA和蛋白表達(dá)變化；免疫組化法檢測(cè)腫瘤組織微血管密度(MVD)和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)情況。<

3、br>　　 結(jié)果：1.與未感染組、空載體感染組相比，LV-OPNshRNA/U251感染組裸鼠皮下腫瘤生長(zhǎng)緩慢，腫瘤體積及重量均明顯減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2.蘇木素-伊紅染色結(jié)果顯示，未感染組、空載體感染組腫瘤細(xì)胞異型性明顯，侵襲能力強(qiáng)。
　　 3.半定量RT-PCR及Western blot結(jié)果表明，LV-OPNshRNA/U251感染組與其它兩組相比，OPN的mRNA和蛋白表達(dá)均明顯下降，

4、同時(shí)uPA、MMP-2、MMP-9的mRNA和蛋白表達(dá)也明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4.免疫組化實(shí)驗(yàn)顯示，與其它兩組相比，LV-OPNshRNA/U251感染組的MVD值和VEGF的表達(dá)水平均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：應(yīng)用慢病毒載體介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)，特異性地沉默U251細(xì)胞中OPN基因的表達(dá)，能夠明顯抑制人U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的生長(zhǎng)和侵襲。半定量RT-P