晚期糖基化終末產(chǎn)物對腎小球系膜細(xì)胞瞬時受體電位陽離子通道蛋白6(TRPC6)表達(dá)的影響.pdf

1、糖尿病的發(fā)病率正在逐年增加，而在終末期腎功能衰竭的患者中，糖尿病腎病（diabetic nephropathy，DN）所占的比例也已增至15％。DN是糖尿病主要并發(fā)癥之一，發(fā)病機(jī)制及其復(fù)雜，晚期糖基化終末產(chǎn)物（advanced glycation endproducts，AGEs）為其之一，目前研究較多。DN病理特征包括胞外基質(zhì)（extracellularmatrix，ECM）增多，腎小球基底膜（glomerular basement

2、menbrane，GBM）增厚等。在DN的病理生理過程中，腎小球系膜細(xì)胞（glomerular mesangial cells，GMC）最為活躍[1]。鈣離子為第二信使，參與很多生物學(xué)作用，包括GMC收縮，分泌功能，增生及凋亡等。已有報道GMC增生時往往伴有系膜細(xì)胞膜離子通道啟閉的改變，進(jìn)一步研究GMC膜離子通道特性，對從離子通道角度尋找防治糖尿病腎病具有重要意義。瞬時受體勢（transient receptor potential，T

3、RP）是一種新發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞膜上的陽離子通道，主要通過的為Ca2+，瞬時受體勢C（transient receptor potentialcanonical，TRPC）是TRP家族主要成員之一[2]。目前研究表明TRPC6與腎臟疾病有關(guān)，主要是在足細(xì)胞方面，與家族性局灶性節(jié)段性腎小球硬化（focal segmentalglomerulosclerosis，F(xiàn)SGS），蛋白尿等密切相關(guān)[34]，與DN的研究較少見。轉(zhuǎn)化生長因子-β1（tran

4、sforming growth factor-β1，TGF-β1）是一種多功能，具有多向調(diào)節(jié)功能的生長因子，介導(dǎo)了DN腎小球肥大和硬化。本課題研究AGEs是否影響GMCTRPC6的表達(dá)及其與TGF-β1的關(guān)系。
　　 目的：觀察AGEs對體外培養(yǎng)的大鼠GMC TRPC6表達(dá)的影響，及其與TGF-β1的關(guān)系，進(jìn)一步探討AGEs在糖尿病腎病中的發(fā)病機(jī)制。
　　 方法：原代培養(yǎng)大鼠腎小球系膜細(xì)胞，3代后GMC分為實(shí)驗(yàn)組AGE-

5、BSA組和對照組BSA組，刺激24小時，收集細(xì)胞，提取蛋白質(zhì)，應(yīng)用免疫印跡和免疫熒光技術(shù)檢測TRPC6的表達(dá)；同樣3代后GMC實(shí)驗(yàn)組予TGF-β1（10ng/ml）處理，設(shè)陰性對照，免疫印跡，RT-PCR和免疫熒光技術(shù)檢測TRPC6的表達(dá)。
　　 結(jié)果：1.免疫熒光顯示GMC表達(dá)TRPC6，以細(xì)胞膜表達(dá)為主。2.不同劑量AGE-BSA，BSA對GMC TRPC6蛋白表達(dá)的影響：BSA處理組不同濃度組比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.0

6、5）；AGE-BSA處理組TRPC6表達(dá)水平隨濃度升高逐漸下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），且呈劑量依賴性。
　　 3.與BSA處理組相比，免疫熒光顯示AGE-BSA處理組TRPC6蛋白表達(dá)減少。
　　 4.與正常組相比，TGF-β1處理組TRPC6核酸和蛋白表達(dá)水平下降（p<0.05）。
　　 5.與正常組相比，免疫熒光顯示TGF-β1處理組TRPC6蛋白表達(dá)減少。
　　 結(jié)論：GMC表達(dá)IRPC6，