梨腐爛病菌多聚半乳糖醛酸酶基因功能的初步研究.pdf

1、梨腐爛病是我國梨樹上的一種重要的枝干病害，在北方梨產(chǎn)區(qū)發(fā)病嚴(yán)重的梨園常造成大量死樹或毀園，病菌侵染梨樹后導(dǎo)致細(xì)胞壁降解而表現(xiàn)樹皮腐爛癥狀，但有關(guān)梨腐爛病菌果膠酶基因的研究尚未見報道。本研究根據(jù)實驗室前期獲得的梨腐爛病菌強(qiáng)致病力菌株F-HN-6和弱致病力菌株F-HN-2a-1的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析，預(yù)測獲得1個聚半乳糖醛酸酶相對表達(dá)量上調(diào)的基因Vamepg，通過基因敲除和轉(zhuǎn)化子致病力比較，對Vamepg基因在梨腐爛病菌侵染梨過程中的功能進(jìn)行了初

2、步研究，取得的主要研究結(jié)果如下:
　　1、通過Real-Time PCR驗證Vamepg基因的相對表達(dá)量，結(jié)果表明梨腐爛病菌強(qiáng)致病力菌株F-HN-6 Vamepg基因的表達(dá)量為弱致病力菌株F-HN-2a-1的1.86倍，預(yù)測分析發(fā)現(xiàn)Vamepg基因編碼的外切聚半乳糖醛酸酶具有外分泌功能，能夠分泌到細(xì)胞膜外。
　　2、采用Double-joint PCR方法構(gòu)建線性敲除載體，利用PEG介導(dǎo)原生質(zhì)體遺傳轉(zhuǎn)化方法，獲得能夠在含潮霉

3、素的培養(yǎng)基上生長的轉(zhuǎn)化子。分別采用4對檢測引物篩選轉(zhuǎn)化子和Southern Blot鑒定為單拷貝，獲得4個缺失Vamepg基因的突變體。并利用基因互補(bǔ)方法獲得2個Vamepg基因的互補(bǔ)突變體，說明梨腐爛病菌可以采用線性載體利用PEG介導(dǎo)原型質(zhì)體轉(zhuǎn)化方法進(jìn)行基因敲除。
　　3、缺失Vamepg基因的突變體在PDA培養(yǎng)基上生長速度略微降低，分生孢子器大小及形態(tài)無差異，但在枝條上的致病力顯著降低。Vamepg基因的互補(bǔ)突變體的生長速度和