核盤菌弱毒菌株SX276生物學特性及其攜帶RNA病毒的研究.pdf

1、核盤菌是一種寄主范圍十分廣泛、危害特別嚴重的植物病原真菌，全世界每年因其引致的菌核病而造成的經濟損失十分慘重。真菌病毒是一類寄生真菌的病毒，其中一些真菌病毒能夠引起真菌寄主致病力衰退，具有很好的生物防治潛力而備受關注。因此，在核盤菌中篩選和挖掘弱毒資源，不僅可以為核盤菌菌核病的防治提供新思路，同時也有利于探究真菌病毒的分類與進化、真菌病毒與寄主之間的互作機制。
　　分離采集自陜西省的1063個核盤菌菌核進行純培養(yǎng)，從中篩選出100

2、株菌落形態(tài)異常的菌株進行宏轉錄組測序，結果檢測到49種不同病毒的信息，其中病毒核盤菌彈狀病毒1（Sclerotinia sclerotiorum Rhabdovirus1，SsRhV1）存在于菌株SX276中。相對于菌株Ep-1PNA367，菌株SX276菌落形態(tài)異常、生長速度慢、致病力完全喪失。進一步對菌株SX276中是否含有其它類型病毒進行了分析，證實菌株SX276攜帶有4種不同類型的病毒，分別是病毒SsRhV1、內源病毒SsEV2

3、(Sclerotiniasclerotiorum endornavirus2)、弱毒病毒SsHV1-like(Sclerotinia sclerotiorum hypovirus1-like)及雙節(jié)段病毒SsBRV2(Sclerotinia sclerotiorum botytivirus2)。
　　在真菌中首次發(fā)現隸屬于彈狀病毒科的負義鏈RNA病毒。病毒SsRhV1，基因組大小為11356nt，基因組5'末端沒有帽子結構，3'末

4、端也沒有poly A尾巴，且5'末端序列和3'末端序列反向互補。病毒SsRhV1基因組推定出5個線性排布的非重疊開放閱讀框（open reading frame，ORF），其中ORF1/4/5推定編碼的蛋白序列與彈狀病毒科病毒的N/G/L蛋白有同源性，但是ORF2/3編碼蛋白未在病毒數據庫中發(fā)現同源序列。病毒SsRhV1的基因間隔區(qū)序列是一串富含A/U且相對保守的序列，分析發(fā)現病毒的終止密碼子為UAA，終止序列為AUAUAA，起始密碼子

5、為AUG，起始序列為UCA(U/C/A)(U/C/A)AUG，基因的終止信號和起始信號相互交匯，重合的序列正是富含A/U的保守序列，這段保守序列中包含病毒SsRhV1的TTP保守結構域序列AAA(A/G)A以及TI保守結構域序列AACAGA。系統(tǒng)發(fā)育分析表明病毒SsRhV1與動物彈狀病毒親緣關系較近，但獨立聚類一個遺傳分支，建議以該病毒為模式種建立一個新的病毒屬。病毒SsRhV1的病毒粒子可能呈線狀，直徑在30 nm左右，長度在500n

6、m-1200nm不等，病毒粒子表面光滑沒有看見明顯的突起結構。病毒SsRhV1的傳毒效率極低，沒有獲取傳毒成功的轉化子。通過脫毒的方法，推測病毒SsRhV1/SX276可能對寄主核盤菌的生物學特性產生一定的影響。
　　病毒SsEV2基因組具有其獨特性，且該病毒與寄主弱毒特性相關。根據獲得的SsEV2部分cDNA序列(11586nt)，證實該病毒基因組含有2個推定的完整非重疊ORF，其中ORF1編碼蛋白含有3486個氨基酸，ORF2

7、編碼蛋白含有290個氨基酸，ORF1和ORF2之間的間隔序列長度為206 bp。在病毒SsEV2的ORF1編碼蛋白上預測出5個保守的基序(motif)，依次為甲基轉移酶(MTR)、富含半胱氨酸區(qū)域(CRR)、兩個解旋酶(DExH和HEL)和S7，而ORF2編碼含有8個保守氨基酸位點或結構域的依賴于RNA的RNA聚合酶(RdRp)。系統(tǒng)發(fā)育分析表明病毒SsEV2與真菌內源病毒有同源性，但結合其基因組獨特性(含有兩個ORF)，推定是一個新的