重癥急性胰腺炎血管內皮功能障礙的實驗研究.pdf

1、第一部分重癥急性胰腺炎大鼠模型的建立及其血管內皮功能變化
　　目的：建立易復制，可操作性，穩(wěn)定性好的重癥急性胰腺炎(SAP)動物模型，觀察在SAP病理狀態(tài)下血管內皮細胞(VEC)形態(tài)學、功能學改變。
　　方法：健康雄性SD大鼠64只，隨機分為假手術組（C組），SAP組（A組），每組32只。C組開腹后只翻動十二指腸及胰腺后關腹;A組胰膽管內逆行輸注1.5％脫氧膽酸鈉制備SAP模型。術后6、12、24、48h分別處死大鼠（每個時

2、點8只），觀察胰腺組織形態(tài)學改變并進行評分;胰腺腺泡細胞及血管內皮細胞超微病理改變;檢測血清淀粉酶含量;檢測腸系膜上動脈內皮依賴性舒縮功能。
　　結果：1.A組大鼠胰腺組織出現炎細胞浸潤、腺泡細胞水腫、顆粒樣凝固性壞死，小葉結構破壞等典型的壞死性胰腺炎的病理改變，胰腺病理學評分較C組顯著升高(P＜0.05);并且隨著時間延長，病變逐漸加重(P＜0.05)，A組于造模6小時光鏡下觀察到胰腺內血栓形成;C組胰腺組織形態(tài)正常。2.透射電

3、鏡下觀察C組胰腺腺泡細胞及內皮細胞亞細胞結構基本正常;A組腺泡細胞腫脹，粗面內質網顯著擴張，細胞內見大量空泡; A組胰腺內血管內皮細胞褶皺，腫脹，基底膜變疏松，胞膜破損甚至細胞死亡脫落。3.A組各時間點血清淀粉酶顯著高于C組(P＜0.05)，并于12h達高峰，與同組24h、48h水平無顯著差異;C組組間無差異。4.A組血管內皮舒張度6h即較C顯著下降（P＜0.05），之后隨著時間的推移，緩慢下降;6h、12h血管內皮收縮反應度與C組無明

4、顯差異，至24h后明顯降低(P＜0.05);C組血管內皮依賴性收縮反應度正常。
　　結論：1.應用逆行性胰膽管注射1.5％脫氧膽酸鈉可以制備SAP動物模型，造模后大鼠血清淀粉酶改變，病理切片及透射電鏡下觀察符合SAP病理及超微病理改變。2.AP發(fā)病的早期即發(fā)生血管內皮損傷的形態(tài)學和功能學改變。
　　第二部分重癥急性胰腺炎血管內皮功能障礙發(fā)生機制及影響因素
　　目的：探討重癥急性胰腺炎血管內皮功能障礙的發(fā)生機制及影響因素

5、。
　　方法：64只雄性SD大鼠，隨機分為假手術組（C組），SAP組（A組），每組32只，按第一部分方法制作動物模型。建立模型后分別于6h、12h、24h、48h處死大鼠，取下腔靜脈血用ELISA檢測血清TNF-α、ET-1含量;用比色法檢測胰腺組織MDA含量及MPO活力;取胰腺組織用RTQ-PCR檢測胰腺組織ICAM-1、VCAM-1、E-selectin基因表達;用Western-blot檢測胰腺組織ICAM-1、VCAM-1

6、、E-selectin蛋白表達。
　　結果：1.A組大鼠血清TNF-α水平早期即迅速升高，并且隨著時間的推移，呈逐漸增高趨勢;A組大鼠血清ET-1水平在6h即顯著升高，并持續(xù)升高至12h達高峰，至48h仍維持較高水平，各時點TNF-α、ET-1均較C組顯著升高(P＜0.05)。2.與C組同一時點相比較，A組胰腺組織MDA、MPO含量顯著增高(P＜0.05)并且呈現隨時間延長而增加的趨勢。3.C組大鼠胰腺組織中ICAM-1、VCAM

7、-1、E-selectin基因低水平表達;A組大鼠胰腺各時點ICAM-1基因表達較C組顯著增高(P＜0.05)，于12h達峰值后持續(xù)高表達，12h，24h，48h表達量無顯著差異;A組各時點VCAM-1基因表達較C組顯著增高(P＜0.05)，6h后表達增高迅速，12h達高峰，并持續(xù)高表達至48小時;E-selectin各時點基因表達較C組顯著增高（P＜0.05），兩組組間各時間點表達無明顯差異。4.ICAM-1蛋白在C組中僅少量表達，A

8、組中6h表達較C明顯升高，12h，24h，48h呈較高表達;VCAM-1蛋白在C組中微量表達，A組造模6h后顯著增高，24h達峰值，48h表達水平仍較高;E-selectin在C組中僅少量表達，A組中6h其表達量即明顯增高，并且呈高水平表達維持至48h。
　　結論：SAP時血清TNF-α、ET-1水平，胰腺MPO活力，MDA含量及ICAM-1、VCAM-1、E-selectin基因及蛋白表達顯著增高;炎性因子、氧化應激及粘附分子共

9、同參與了SAP血管內皮功能損傷的病理過程。
　　第三部分低分子肝素對重癥急性胰腺炎大鼠的保護作用
　　目的：探討低分子肝素對SAP大鼠的保護作用。
　　方法：96只雄性SD大鼠隨機分為假手術組（C組），急性壞死性胰腺炎組(A)組，低分子肝素干預組（G組），每組32只，按第一部分實驗方法制作動物模型，C組于SAP造模后給予皮下注射低分子肝素(10U/100g)。于造模后6h、12h、24h、48h處死大鼠，觀察胰腺病理改

10、變并評分;檢測血清淀粉酶含量;檢測血清TNF-α、ET-1含量;檢測胰腺組織MDA含量及MPO活力;檢測胰腺組織E-selectin mRNA及蛋白表達水平;檢測腸系膜上動脈內皮依賴性舒縮功能。
　　結果：1.G組各時點胰腺病理學評分較A組顯著下降(P＜0.05);2.G組各時點血清淀粉酶較A組顯著下降(P＜0.05);3.G組血清TNF-α及ET-1水平較A組顯著下降(P＜0.05);4.G組大鼠各時點MDA水平較A組大鼠同時點

11、無顯著差異，較C組大鼠同時點胰腺MDA含量高(P＜0.05);G組大鼠各時點MPO水平較A組大鼠同時點明顯降低，6h、12h較C組同一時點差異無顯著性，24h、48h較C組升高(P＜0.05);5.G組各時點E-selectinmRNA及蛋白表達水平較A組顯著下降;6.G組大鼠血管內皮舒張反應度6h、12h較A組升高（P＜0.05），與C組無顯著差異，24h，48h較A組同一時間點無顯著差異，較C組同一時間點降低(P＜0.05);G組大