低氧預(yù)適應(yīng)對自體肝移植大鼠Bcl-2蛋白表達(dá)的影響及其意義.pdf

1、一、目的及意義： 細(xì)胞凋亡又稱程序性細(xì)胞死亡，它是一種不同于細(xì)胞壞死，而由基因控制的細(xì)胞自我消亡方式。目前，人們對肝臟缺血再灌注損傷(ischemia-reperfusion injury，IRI)時細(xì)胞凋亡的發(fā)生機制研究頗多，尤其是多種基因參與細(xì)胞凋亡的調(diào)控如Bcl-2基因家族、Caspase(門冬氨酸水解酶)家族、TNF(腫瘤壞死因子)受體家族、Fas(死亡受體)家族和即早基因(IEGS)家族等，其中Bcl-2基因家族一直被

2、視為研究的熱點。 Bcl-2基因?qū)儆谝活愋碌陌┗蚣易?，按照功能可分為促凋亡基因和抑凋亡基因兩大類抑凋亡基因包括Bcl-2，Bcl-xl，Bcl-w等；促凋亡基因包括Bcl-xs，Bax，bad，Bak，Bim等。其中，Bcl-2抑凋亡基因是最重要的凋亡調(diào)控基因，也是研究最為成熟的基因[1]。Bcl-2蛋白則是由Bcl-2抑制基因表達(dá)的，控制線粒體中致凋亡因子釋放的抗凋亡蛋白。已有實驗證實：通過干擾線粒體的融合分裂過程，它可以

3、減輕線粒體損傷從而抑制細(xì)胞凋亡。 低氧預(yù)適應(yīng)(Hypoxia Preconditioning,HP)是指通過1次或多次短暫、非致死性低氧刺激后，機體獲得的對更嚴(yán)重甚至致死性缺血或缺氧的耐受，它是機體抗缺氧或缺血的一種內(nèi)源性保護現(xiàn)象。2004-2006年期間，我們曾將HP應(yīng)用到大鼠異體原位肝移植模型中，研究發(fā)生在肝移植中的IRI模型，我們初步發(fā)現(xiàn)HP可以減輕IRI后的肝細(xì)胞壞死[2-4]，但是至于HP是否可以通過一些內(nèi)在途徑來影響

4、肝細(xì)胞凋亡尚未得到實驗證實。為此，本實驗在原模型的基礎(chǔ)上進行改良，成功地建立了經(jīng)由門靜脈灌肝的70％自體原位肝移植IRI模型[5]，該模型模擬了肝移植過程，手術(shù)簡單、成功率高、而且排除了免疫因素的影響，更好地反映了肝移植時IRI的病理生理過程。實驗組通過觀察HP對IRI后不同時相中肝組織Bcl-2蛋白含量的改變，并依據(jù)肝功能、及各組肝細(xì)胞的顯微，超微結(jié)構(gòu)改變、線粒體損傷程度等檢測指標(biāo)來綜合評價肝細(xì)胞凋亡的程度，探討低氧預(yù)適應(yīng)對自體肝移植

5、大鼠細(xì)胞凋亡的影響及其可能的機制，為進一步減輕肝臟IRI所導(dǎo)致的肝細(xì)胞凋亡提供理論依據(jù)。 二、方法 采用經(jīng)門靜脈灌注法自體肝移植模型來模擬肝移植中的缺血再灌注損傷(Ischemical Reperfusion Injury, IRI)，將SD大鼠隨機分為正常對照(NC)、自體移植(AT)和低氧預(yù)適應(yīng)+自體移植組(HP+AT)三組，每組24只，每個時段8只。低氧預(yù)適應(yīng)方法為術(shù)前用8％氮氧混合氣體處理90分鐘[6,7]，分別

6、于術(shù)后1，6，24h三個時間點處死大鼠取肝臟標(biāo)本，抽血檢測肝功能，免疫組化方法測定大鼠肝組織Bcl-2蛋白的表達(dá)，并在光鏡和透射電鏡下觀察各組肝細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變、線粒體損傷程度等。 三、結(jié)果 HP+AT組血清ALT、AST水平較AT組比較有顯著性差異(P<0.05)，HP+AT組各時段的肝功能明顯好于AT組；HP+AT組各時段的Bcl-2蛋白與AT組比較也具有顯著性差異(P<0.05)，Bcl-2蛋白的表達(dá)明顯高于