KIF11調(diào)控EGF介導的細胞趨向性遷移.pdf

1、腫瘤惡性轉(zhuǎn)移是引起癌癥相關(guān)疾病死亡率的主要原因，是腫瘤細胞從原發(fā)腫瘤經(jīng)細胞基質(zhì)進入血管，對不同趨化信號反應而定向遷移的結(jié)果。微管受調(diào)控感應方向信號，并做出反應，這對細胞極性和遷移很重要；目前的模型還無法解釋細胞缺乏趨化信號時偏向某一個方向遷移的具體機制，微管極性核心調(diào)控機制也不清楚。
　　我們以人的乳腺腫瘤細胞 MDA-MB-231/IMP1細胞系為實驗對象，通過兩種不同shRNA編碼慢病毒感染方式，使微管驅(qū)動蛋白 KIF11(也

2、稱 Eg5)被穩(wěn)定敲減，文中分別用kdKIF11-1，kdKIF11-2表示。蛋白質(zhì)免疫印跡分析顯示KIF11被shRNA成功敲減，分別低表達58﹪和79﹪，但Rac1表達水平并未受到影響；實驗細胞系也保持著清晰一致的微管結(jié)構(gòu)。同對照組細胞(慢病毒載體感染)相比，劃痕實驗中，兩組低表達細胞系的移動速度呈現(xiàn)14-45％的增加；相對地，在基質(zhì)膠包被transwell的侵襲試驗中，低表達KIF11細胞侵襲能力下降了70%。為確定細胞侵襲能力下

3、降是否受趨化性影響，我們用膠原代替基質(zhì)膠，并用表皮生長因子(EGF)作化學誘導物，發(fā)現(xiàn)其趨化性遷移能力減少了44%-54%；然而，當 transwell上、下都加入相同濃度 EGF激活細胞移動并且排除趨化性影響時，只有對照組細胞遷移能力下降，這表明低表達KI F11未破壞細胞遷移，卻嚴重破壞其趨化性。
　　因此我們認為，細胞缺乏有絲分裂驅(qū)動蛋白KIF11時，無法對EGF介導的趨化反應做出相應反應。接著，通過MDA-MB-231和小

4、鼠胚胎成纖維母細胞NIH3T3中KIF11免疫共沉淀實驗，當加入EGF作用15分鐘后，用抗磷酸酪氨酸和EGFR抗體檢測到與EGF受體(EGFR)蛋白類似的180kD條帶；相對應地，EGFR免疫共沉淀實驗也檢測到KIF11被沉淀下來，表明兩組細胞系中存在 KIF11/EGFR復合物，但并不受 EGF影響。然而在MDA-MB-231細胞系中，KIF11/EGFR免疫熒光染色實驗顯示加入EGF會使該復合物在內(nèi)化的EGF受體形成的囊泡結(jié)構(gòu)中，臨