氮6-環(huán)戊基腺苷對(duì)大鼠腎缺血-再灌注損傷延遲性保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:腎缺血-再灌注損傷(RIRI)是臨床工作中經(jīng)常遇到的問題,在一些腎臟手術(shù)如腎實(shí)質(zhì)切開取石、腎部分切除、腎蒂損傷修復(fù)等手術(shù)中,暫時(shí)阻斷腎臟血流是必要的。作為一名麻醉工作者臨床上也經(jīng)常會(huì)遇到急性腎缺血、急性腎功能衰竭等情況。如何減輕和防治腎缺血一再灌注損傷,一直是人們對(duì)腎臟損傷保護(hù)的主要研究課題。腎缺血一再灌注損傷的發(fā)主要機(jī)制為:氧自由基增多、細(xì)胞內(nèi)鈣超載和鈣震蕩、細(xì)胞內(nèi)PH和滲透壓的改變、內(nèi)皮細(xì)胞的激活、中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的損傷、微血管

2、損傷、細(xì)胞因子和核因子-KB(NF-κB)等所引起的損傷以及腎臟組織細(xì)胞的凋亡。目前關(guān)于如何減輕或防治腎缺血-再灌注損傷的研究甚多,但其臨床實(shí)用價(jià)值均不大。為尋求更大的臨床實(shí)用價(jià)值,近年來關(guān)于如何啟動(dòng)內(nèi)源性抗損傷機(jī)制成為研究的熱點(diǎn),關(guān)于腺苷A1受體激動(dòng)劑的研究就是其中的熱點(diǎn)之一。目前國(guó)內(nèi)關(guān)于腺苷A1受體在心臟、腦等器官缺血一再灌注損傷保護(hù)作用的研究已有大量報(bào)道,但目前國(guó)內(nèi)尚無關(guān)于腺苷A1受體激動(dòng)劑在腎缺血-再灌注損傷中作用的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)

3、通過建立大鼠腎缺血-再灌注損傷模型,探討氮6-環(huán)戊基腺苷(N6-Cyclopentyl adenosine,CPA)對(duì)大鼠腎缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用,為尋找防治腎缺血-再灌注損傷有效的藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:32只Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠,體重250-300g,隨機(jī)分為4組,每組8只,①假手術(shù)組(S組),②缺血-再灌注組(I/R組),③CPA預(yù)先給藥+缺血-再灌注組(C組),④CPA+8-環(huán)戊基-1

4、,3-二丙基黃嘌呤(8-Cyclopentyl-1,3-2-propyl xanthine,DPCPX)預(yù)先給藥+缺血-再灌注(CD組)。
　　 10％水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉,一側(cè)頸內(nèi)靜脈穿刺,0.9％生理鹽水8ml/kg·h持續(xù)泵入。采用夾閉雙側(cè)腎蒂45min,再灌注24h制備腎缺血-再灌注損傷模型。用無創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)腎蒂,腎臟顏色由紅變?yōu)樽霞t色即可確認(rèn)腎血流被阻斷,造成腎缺血45min后,松開動(dòng)脈夾,腎臟由紫紅色

5、恢復(fù)為紅色即可確認(rèn)血流恢復(fù)。①假手術(shù)組(S組):僅行開腹,游離雙側(cè)腎臟,分離雙側(cè)腎蒂但不夾閉,傷口用生理鹽水紗布覆蓋,暴露45min不做腎缺血處理；②缺血一再灌注組(I/R):暴露腎臟后夾閉雙側(cè)腎蒂,缺血45min后開放動(dòng)脈夾,再灌注24h；③CPA+缺血45min再灌注24h組(C組):CPA1.0 mg&g在夾閉腎蒂前15 min腹腔內(nèi)注射,余操作同I/R.組④:CPA+DPCPX預(yù)先給藥+缺血45min再灌注24h組(CD組)；C

6、PA1.0 mg&g DPCPX1.0 mg/kg在夾閉腎蒂前15 min腹腔內(nèi)注射,余操作同I/R組。
　　 所有動(dòng)物均于再灌注24h時(shí)處死。酶法測(cè)定血清肌酐(creatinine,Cr)水平、苦味酸不除外蛋白法測(cè)定血清尿素氮(usea nitrogen,BUN)水平；比色法測(cè)定腎組織丙二醛(malondidehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、髓過氧化物酶(myel

7、operoxidase,MPO)含量；腎組織制備腎臟單細(xì)胞懸液,經(jīng)碘化丙啶(propidine iodide,PI)染色后用流式細(xì)胞分析法測(cè)定腎臟細(xì)胞凋亡率。蘇木素一伊紅(hematoxvlin-eosin,HE)染色觀察腎組織病理學(xué)變化。
　　 結(jié)果:
　　 1血清Cr和BUN濃度變化
　　 與S組比較,再灌注24h時(shí),I/R組、C組、CD組血清Cr和BUN濃度明顯升高(P<0.05)。與I/R,CD組比較,C

8、組Cr和BUN濃度明顯降低(P<0.05)；
　　 I/R組和CD組之間比較差別不大(P>0.05)。
　　 2腎組織的SOD活性和MDA含量MPO含量的變化
　　 與S組相比,I/R組、C組、CD組腎組織SOD活性均降低,MDA,MPO含量均升高(P<0.05)；
　　 與I/R,CD組比較,C組SOD活性升高,MDA,MPO含量均減少(P<0.05)。
　　 UR組和CD組之間比較差別不大(P

9、>0.05)。
　　 3光鏡下觀察腎組織的病理改變
　　 S組腎小球、腎小管未發(fā)現(xiàn)明顯的形態(tài)學(xué)改變。
　　 FR組腎小球細(xì)胞數(shù)量減少,部分腎小球局部有壞死,球叢毛細(xì)血管擴(kuò)張充血,內(nèi)有炎細(xì)胞浸潤(rùn),腎小管上皮細(xì)胞嚴(yán)重水腫、壞死、脫落,管腔狹窄,部分腎小管腔內(nèi)可見蛋白管型。間質(zhì)內(nèi)血管擴(kuò)張充血,有炎細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　 C組球從毛細(xì)血管擴(kuò)展充血比I/R組減輕,少量炎細(xì)胞浸潤(rùn),腎小管上皮水腫減輕部分腎小管腔內(nèi)可見少量蛋

10、白管型。
　　 CD組與I/R組相比無明顯變化。
　　 4腎組織細(xì)胞凋亡率的變化
　　 與S組相比,I/R組、C組和CD組腎組織細(xì)胞凋亡率明顯升高(P<0.05)。
　　 與I/R組相比C組腎組織細(xì)胞凋亡率明顯降低(P<0.05)。
　　 與CD組比較C組腎組織細(xì)胞凋亡率明顯降低(P<0.05)。
　　 I/R組與CD組比較差別不大(P>0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1