Nlrp3炎癥復(fù)合體在缺血性疾病中作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:缺血性疾病包括冠心病和外周血管栓塞型疾病等，嚴(yán)重威脅著人類健康。Nlrp3炎癥復(fù)合體是新近發(fā)現(xiàn)的調(diào)控機(jī)體內(nèi)重要的炎性介質(zhì)白介素1β(IL-1β)和白介素18(IL-18)分泌的大分子復(fù)合物。本研究通過(guò)檢測(cè)臨床患者局部組織Nlrp3炎癥復(fù)合體的表達(dá)初步揭示其在缺血性疾病（冠狀動(dòng)脈粥樣硬化）中的可能作用，繼而通過(guò)基因敲除的方法在小鼠后肢缺血模型中探討Nlrp3炎癥復(fù)合體對(duì)缺血后血流再通的影響，最后在細(xì)胞水平探討促使Nlrp3炎癥復(fù)合體

2、激活的因素。
　　 研究方法:選取心外科行冠脈搭橋手術(shù)病人作為冠心病組，行瓣膜置換或先心病手術(shù)病人作為對(duì)照組（冠脈造影排除冠心?。?，收集他們的心外膜下脂肪和外周血，通過(guò)realtime PCR和Western Blot的方法檢測(cè)Nlrp3的表達(dá)情況。繼而構(gòu)建小鼠后肢缺血模型，觀察Nlrp3敲除或Caspase1敲除小鼠后肢缺血后血流再通情況，用流式細(xì)胞術(shù)的方法測(cè)定不同基因型小鼠外周血PBMCs中Sca-1和Flk-1雙陽(yáng)性細(xì)胞的

3、比例以反映內(nèi)皮祖細(xì)胞的動(dòng)員情況，提取小鼠骨髓來(lái)源內(nèi)皮祖細(xì)胞，體外檢測(cè)不同基因型小鼠的內(nèi)皮祖細(xì)胞的功能（粘附，遷移,成血管）。在體外，用線粒體來(lái)源DAMP fMLP處理骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞，并給予LPS或缺氧干預(yù)，用ELISA檢測(cè)上清中IL1 beta水平。
　　 結(jié)果:心外膜脂肪和外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)中Nlrp3炎癥復(fù)合體的水平明顯升高。Nlrp3炎癥復(fù)合體在心外膜脂肪的表達(dá)較皮下脂肪和心周脂肪高。在小鼠后肢缺血模型中，炎

4、癥復(fù)合體敲除后其血流再通較對(duì)照組明顯減慢。Nlrp3敲除或Caspase1敲除后小鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞動(dòng)員和粘附功能減低而內(nèi)皮祖細(xì)胞遷移和管腔化功能無(wú)明顯改變。線粒體來(lái)源的DAMP fMLP作用于LPS預(yù)處理的骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞可促使其分泌IL1 beta。同時(shí)，缺氧單獨(dú)刺激無(wú)法激活炎癥復(fù)合體，當(dāng)缺氧和LPS或缺氧和fMLP共同作用時(shí)可以激活炎癥復(fù)合體。
　　 結(jié)論:我們的研究揭示了Nlrp3炎癥復(fù)合體在缺血性疾病中發(fā)揮重要作用，它與冠狀