Dot-ELISA檢測牛D型產(chǎn)氣莢膜梭菌病抗體的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、產(chǎn)氣莢膜梭菌（Cl.perfringens）是一種梭狀芽孢屬條件性致病菌，該病廣泛分布于自然界，在一定條件下，可引起嚴(yán)重的犢牛腸毒血癥,甚至死亡。而針對該病菌體蛋白產(chǎn)生的特異抗體尚無一套完整的血清學(xué)檢測方法。因此，本研究目的是以純化的菌體蛋白建立一種快速、準(zhǔn)確、敏感的血清學(xué)診斷方法。
　　本試驗成功地以Cl.perfringens D型標(biāo)準(zhǔn)株C60的菌體經(jīng)過超聲波裂解后，進行了SephadexG-200凝膠柱純化、SDS-PAGE

2、和Western blot分析，提純的140KD大小的Cl.perfringens菌體蛋白與牛血清中D型Cl.perfringens抗體具有良好的特異性反應(yīng)。因此，純化后的Cl.perfringens140KD菌體蛋白可以用于建立牛D型Cl.perfringens病間接Dot-ELISA的診斷抗原。
　　本試驗對間接Dot-ELISA的反應(yīng)條件進行了優(yōu)化，確定了最適工作條件。結(jié)果表明，試驗流程中最適抗原包被濃度1.95μg/mL、

3、最適血清稀釋度1:320及最適酶標(biāo)兔抗牛IgG的工作濃度1:2000；采用Dot-ELISA檢測同一份1:320倍稀釋的陽性血清抗體時粗提抗原的濃度為40.6μg/mL時，而提純抗原的濃度僅為1.9μg/mL；應(yīng)用提純抗原的Dot-ELISA對100份牛血清進行檢測，敦化地區(qū)陽性率最高；用二抗體間接Dot-ELISA和AGID同時檢測30份陽性血清的抗體滴度，結(jié)果二法所測抗體平均滴度分布為1:736和1:17，間接Dot-ELISA的相

4、對靈敏度為AGID的43倍；而且所建立的二抗體間接Dot-ELISA不與牛產(chǎn)氣莢膜梭菌病A、B、C、E型陽性血清反應(yīng)，表明該法具有較高的特異性。
　　本試驗在國內(nèi)首次應(yīng)用純化的D型Cl.perfringens菌體蛋白為抗原，成功建立了檢測牛血清中D型Cl.perfringens抗體的間接Dot-ELISA診斷方法，所建立的Dot-ELISA法除了具有ELISA的高度特異性和敏感性之外，還具有抗原用量少，快速、簡便等優(yōu)點，為牛產(chǎn)氣莢

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