彎曲菌耐藥性與耐藥基因檢測分析及其基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜的分型研究.pdf

1、彎曲菌是世界范圍內(nèi)造成人類細菌性腹瀉的重要致病菌之一，其中最常見的是空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌感染。無論是在發(fā)展中國家還是在發(fā)達國家，彎曲菌的感染率都呈上升趨勢；更為嚴重的是，感染率的上升造成耐藥彎曲菌的迅速出現(xiàn)。同時有研究證明，臨床使用抗生素尤其是喹諾酮類抗生素是加快彎曲菌耐藥性出現(xiàn)的主要原因。
　　 通常來說，抗生素藥敏實驗標準操作方法對大多數(shù)的微生物都是適用的，其中被廣泛接受并應用的是CLSI(臨床實驗室標準化協(xié)會)提供的指導

2、方針。但是由于彎曲菌是微需氧菌，在微氧條件下才能生長，對其的抗生素藥敏試驗沒有一個可用的實驗操作標準，也沒有明確的耐藥突破點判定標準。因此，在臨床、微生物實驗室的檢測中出現(xiàn)了許多不同的方法，例如：紙片擴散法和微量肉湯稀釋法。
　　 本研究的目的是(1)比較紙片擴散法和微量肉湯稀釋法，確定紙片擴散法能否成為彎曲菌藥敏試驗的可靠的備選方法(2)分析耐藥基因在空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌中的分布，為彎曲菌的分子流行病學監(jiān)測、研發(fā)新型抗菌藥物

3、及指導臨床正確使用抗生素提供科學依據(jù)。(3)利用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)對彎曲菌進行檢測分型。
　　 本研究應用紙片擴散法和微量肉湯稀釋法分別測定了203株空腸彎曲菌和19株結(jié)腸彎曲菌對11中抗生素的耐藥情況。根據(jù)微量肉湯稀釋法，203株彎曲菌對11種抗生素的耐藥率分別為：紅霉素(2.46％)，鏈霉素(11.82％)，環(huán)丙沙星(91.13％)，阿莫西林(14.78％)，克林霉素(4.93％))

4、，頭孢噻肟(5.91％)，四環(huán)素(84.73％)，左氧氟沙星(83.74％)，諾氟沙星(88.67％)，恩諾沙星(88.67％)，萘啶酸(88.18％)。比較紙片擴散法和微量肉湯稀釋法的結(jié)果，兩種方法測定環(huán)丙沙星、諾氟沙星、恩諾沙星、左氧氟沙星、萘啶酸和鏈霉素耐藥情況結(jié)果具有較高的一致性，其它幾種抗生素符合率相對較低。根據(jù)統(tǒng)計分析結(jié)果，我們有以下的建議：紅霉素的敏感的突破點由≤0.5μg/mL改為≤1μg/mL；四環(huán)素的敏感突破點由≤4

5、μg/mL改為2μg/mL；克林霉素耐藥的抑菌圈直徑由≤18mm改為≤14mm；阿莫西林的敏感突破點由≤8μg/mL改為≤4μg/mL，同時耐藥突破點有≥32μg/mL改為≥64μg/mL，這樣將明顯提高兩種方法的符合率。
　　 對彎曲菌耐藥基因的檢測結(jié)果顯示，6株鏈霉素耐藥的分離株攜帶aadA基因，占總數(shù)的2.96％，12株鏈霉素耐藥的彎曲菌攜帶aadE，占總數(shù)的5.91％。84.73％的分離株攜帶tetO gene，這些分離

6、株四環(huán)素高度耐藥。對紅霉素耐藥的彎曲菌基因片段序列分析結(jié)果表明，紅霉素耐藥彎曲菌23S rRNA基因上存在一個A2075G的點突變。然而，對23株喹諾酮類耐藥的彎曲菌gyrA基因序列分析結(jié)果顯示，沒有出現(xiàn)典型的C257T突變。利用半定量RT-PCR檢測23株喹諾酮耐藥彎曲菌cmeB基因的表達情況。結(jié)果顯示，16株彎曲菌cmeB過量表達。這一結(jié)果表明cmeB基因的過表達與彎曲菌對喹諾酮類抗生素耐藥有關。
　　 為研究彎曲菌菌株間的