彎曲菌耐藥性與耐藥基因檢測分析及其基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜的分型研究.pdf

1、彎曲菌是世界范圍內(nèi)造成人類細菌性腹瀉的重要致病菌之一，其中最常見的是空腸彎曲菌和結腸彎曲菌感染。無論是在發(fā)展中國家還是在發(fā)達國家，彎曲菌的感染率都呈上升趨勢；更為嚴重的是，感染率的上升造成耐藥彎曲菌的迅速出現(xiàn)。同時有研究證明，臨床使用抗生素尤其是喹諾酮類抗生素是加快彎曲菌耐藥性出現(xiàn)的主要原因。
　　 通常來說，抗生素藥敏實驗標準操作方法對大多數(shù)的微生物都是適用的，其中被廣泛接受并應用的是CLSI(臨床實驗室標準化協(xié)會)提供的指導

2、方針。但是由于彎曲菌是微需氧菌，在微氧條件下才能生長，對其的抗生素藥敏試驗沒有一個可用的實驗操作標準，也沒有明確的耐藥突破點判定標準。因此，在臨床、微生物實驗室的檢測中出現(xiàn)了許多不同的方法，例如：紙片擴散法和微量肉湯稀釋法。
　　 本研究的目的是(1)比較紙片擴散法和微量肉湯稀釋法，確定紙片擴散法能否成為彎曲菌藥敏試驗的可靠的備選方法(2)分析耐藥基因在空腸彎曲菌和結腸彎曲菌中的分布，為彎曲菌的分子流行病學監(jiān)測、研發(fā)新型抗菌藥物

3、及指導臨床正確使用抗生素提供科學依據(jù)。(3)利用基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(MALDI-TOF MS)對彎曲菌進行檢測分型。
　　 本研究應用紙片擴散法和微量肉湯稀釋法分別測定了203株空腸彎曲菌和19株結腸彎曲菌對11中抗生素的耐藥情況。根據(jù)微量肉湯稀釋法，203株彎曲菌對11種抗生素的耐藥率分別為：紅霉素(2.46％)，鏈霉素(11.82％)，環(huán)丙沙星(91.13％)，阿莫西林(14.78％)，克林霉素(4.93％))

4、，頭孢噻肟(5.91％)，四環(huán)素(84.73％)，左氧氟沙星(83.74％)，諾氟沙星(88.67％)，恩諾沙星(88.67％)，萘啶酸(88.18％)。比較紙片擴散法和微量肉湯稀釋法的結果，兩種方法測定環(huán)丙沙星、諾氟沙星、恩諾沙星、左氧氟沙星、萘啶酸和鏈霉素耐藥情況結果具有較高的一致性，其它幾種抗生素符合率相對較低。根據(jù)統(tǒng)計分析結果，我們有以下的建議：紅霉素的敏感的突破點由≤0.5μg/mL改為≤1μg/mL；四環(huán)素的敏感突破點由≤4

5、μg/mL改為2μg/mL；克林霉素耐藥的抑菌圈直徑由≤18mm改為≤14mm；阿莫西林的敏感突破點由≤8μg/mL改為≤4μg/mL，同時耐藥突破點有≥32μg/mL改為≥64μg/mL，這樣將明顯提高兩種方法的符合率。
　　 對彎曲菌耐藥基因的檢測結果顯示，6株鏈霉素耐藥的分離株攜帶aadA基因，占總數(shù)的2.96％，12株鏈霉素耐藥的彎曲菌攜帶aadE，占總數(shù)的5.91％。84.73％的分離株攜帶tetO gene，這些分離

6、株四環(huán)素高度耐藥。對紅霉素耐藥的彎曲菌基因片段序列分析結果表明，紅霉素耐藥彎曲菌23S rRNA基因上存在一個A2075G的點突變。然而，對23株喹諾酮類耐藥的彎曲菌gyrA基因序列分析結果顯示，沒有出現(xiàn)典型的C257T突變。利用半定量RT-PCR檢測23株喹諾酮耐藥彎曲菌cmeB基因的表達情況。結果顯示，16株彎曲菌cmeB過量表達。這一結果表明cmeB基因的過表達與彎曲菌對喹諾酮類抗生素耐藥有關。
　　 為研究彎曲菌菌株間的