產(chǎn)前給藥地塞米松對(duì)大鼠胎肺形態(tài)結(jié)構(gòu)及Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 產(chǎn)前應(yīng)用地塞米松(DEX)可以抑制炎癥反應(yīng)、促Ⅱ型肺泡細(xì)胞成熟、增加肺表面活性物質(zhì)合成并促其分泌，減少早產(chǎn)兒呼吸窘迫綜合癥(RDS)的發(fā)生，同時(shí)也存在阻礙肺發(fā)育的現(xiàn)象。胚胎時(shí)期的肺發(fā)育受到多條信號(hào)途徑影響，其中Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑參與調(diào)控肺上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞分化、細(xì)胞增殖及凋亡等過(guò)程，在肺發(fā)育過(guò)程中起著重要作用。因此我們采用早產(chǎn)鼠肺模型，比較產(chǎn)前給予不同劑量、不同療程地塞米松對(duì)大鼠胎肺形態(tài)發(fā)育及Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的影響。

2、 方法： 20只孕鼠分5種情況用藥，胎鼠分5組，每組約16只。小劑量、大劑量DEX單程組：分別于孕16、17天注射等量生理鹽水，孕18天腹腔注射DEX 0.4 mg/kg、0.8 mg/kg；小劑量、大劑量DEX多程組：分別于孕16、17、18天腹腔注射DEX 0.4 mg/kg、0.8 mg/kg。注射時(shí)DEX均用生理鹽水稀釋至0.5ml；其中小劑量、大劑量DEX單程組和多程組統(tǒng)稱為DEX組。對(duì)照組：孕16、17、18天

3、注射等量生理鹽水。雌鼠孕19天時(shí)破宮后取胎鼠肺組織作為早產(chǎn)鼠肺模型，每只孕鼠隨機(jī)取4只早產(chǎn)鼠，共16只取全肺分別通過(guò)光鏡觀察及電鏡技術(shù)，分析比較各組胎肺形態(tài)發(fā)育的差異、RT-PCR方法檢測(cè)Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中Wnt7b、Wnt5a、Wnt2、GSK.3p和p-catenin基因mRNA的表達(dá)，Westem-Blot、免疫組化方法檢測(cè)GSK-3β、β-catenin蛋白表達(dá)量和表達(dá)部位。 結(jié)果： 1.HE染色光鏡觀察結(jié)果：

4、DEX組與對(duì)照組相比，肺泡數(shù)目減少、肺泡腔結(jié)構(gòu)擴(kuò)大，肺泡間隔厚度變薄、周圍結(jié)締組織減少。其中小劑量DEX單程、多程組及大劑量DEX單程、多程組每視野肺泡計(jì)數(shù)，平均肺泡間隔厚度均低于對(duì)照組(P<0.01)，平均肺泡表面積均高于對(duì)照組(P<0.01)。 2.電鏡觀察結(jié)果：DEX組Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)板層小體且染色深、致密，胞質(zhì)內(nèi)線粒體等細(xì)胞器增多；而對(duì)照組內(nèi)難見(jiàn)板層小體、細(xì)胞器數(shù)目減少。隨著DEX用藥劑量和次數(shù)的增多，板層小體數(shù)目

5、逐漸增多，基底膜則呈現(xiàn)由完整到斷裂不連續(xù)、由厚薄均一到厚薄不均甚至無(wú)法辨認(rèn)的變化，且大劑量DEX組中的線粒體數(shù)目較小劑量組少，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)也有擴(kuò)張。 3.RT-PCR結(jié)果：DEX組胎肺Wnt7b及β-catenin基因mRNA的表達(dá)量均顯著高于對(duì)照組（p<0.05)；GsK-3β表達(dá)量較對(duì)照組減少(P<0.05)。小劑量DEX單程、多程組及大劑量DEX單程組Wnt5a基因mRNA表達(dá)均低于對(duì)照組(P<0.05)，不同劑量DEX多程組之

6、間差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；DEX組Wnt2基因mRNA表達(dá)與對(duì)照組相比未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 4.Westem_blot結(jié)果：大劑量DEX多程組胞漿GSK-3β蛋白表達(dá)量較對(duì)照組下調(diào)(P<0.05)；DEX組胞漿β-catenin蛋白表達(dá)量較對(duì)照組明顯下調(diào)(P<0.01)，胞核β-catenin蛋白表達(dá)量則較對(duì)照組上調(diào)(P<0.05)。隨著DEX劑量的增大、次數(shù)的增多，胞漿β-catenin蛋白表達(dá)量不斷減

7、低而胞核β-catenin蛋白表達(dá)量不斷增多。 5.免疫組化結(jié)果：對(duì)照組中β-eatenin在肺間質(zhì)和實(shí)質(zhì)均有表達(dá)，其表達(dá)量均低于DEX組(P<0.05)。對(duì)照組可見(jiàn)GSK-3p在肺間質(zhì)和實(shí)質(zhì)也均有表達(dá)且最為明顯，其表達(dá)量明顯高于DEX組(P<0.05.)，并且小劑量DEX單程組中GSK-3p的表達(dá)明顯高于其他DEX組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論： 1.產(chǎn)前給藥DEX可以促進(jìn)胎肺早期發(fā)育，小劑量、單

8、程DEX即可促進(jìn)胎鼠肺部成熟，增加用藥劑量或次數(shù)雖然肺部發(fā)育成熟度有所提高但肺泡化受阻的現(xiàn)象也愈加明顯--肺泡直徑變大，肺泡間隔變薄，總肺泡數(shù)減少，肺組織呈大而空的征象?；啄こ尸F(xiàn)逐漸由厚薄均一到厚薄不均、由完整到不連續(xù)甚至無(wú)法辨認(rèn)的變化，基底膜的這種變化，影響了細(xì)胞的分化、增殖及與間質(zhì)的交流。 2.產(chǎn)前給藥DEX同時(shí)影響了Wnt信號(hào)途徑中Wnt7b、Wnt5a、β-catenin及GSK-3β基因的mRNA和蛋白的表達(dá)。DEX