血栓性疾病及抗栓基因工程抗體的分子生物學(xué)研究.pdf

1、該研究擬探討vWF基因Rsa I、Sma Ⅰ多態(tài)性與血栓性疾病的發(fā)生有無(wú)相關(guān)關(guān)系;并對(duì)基因芯片技術(shù)在SNP檢測(cè)上的應(yīng)用進(jìn)行探討.研究中,我們首先建立vWF基因Rsa I、Sma I多態(tài)性寡核苷酸陣列檢測(cè)方法.設(shè)計(jì)、合成兩組寡核苷酸探針,使用3甲氧基氨基丙基硅烷、戊二醛等化學(xué)物質(zhì),實(shí)現(xiàn)探針與固相支持物玻片的連接.應(yīng)用不對(duì)稱PCR方法擴(kuò)增Rsa I、Sma I多態(tài)性片段,在擴(kuò)增體系中摻入熒光標(biāo)記dUTP,獲得被測(cè)片段的單鏈標(biāo)記產(chǎn)物.對(duì)核酸雜

2、交反應(yīng)的溫度、動(dòng)力學(xué)和離子濃度變化進(jìn)行研究,獲得最佳的雜交鑒別條件.隨機(jī)抽取20名正常人,酶切法確定多態(tài)性基因型,再用寡核苷酸陣列法檢測(cè),以驗(yàn)證該方法的準(zhǔn)確性.使用該方法對(duì)50例血栓病人進(jìn)行檢測(cè),探討血栓性疾病的發(fā)生與vWF基因Rsa I、Sma I多態(tài)性的關(guān)系.結(jié)果表明,寡核苷酸陣列法和酶切法對(duì)20例標(biāo)本檢測(cè)的符合率為100﹪;血栓病人與正常人之間兩位點(diǎn)多態(tài)性的基因型和等位基因頻率的差異均無(wú)顯著意義（P>0.05）.因而該研究成功建立