氧化應(yīng)激狀態(tài)下人小梁網(wǎng)細(xì)胞中miRNA199b-5p對(duì)TGF-β2作用機(jī)制的研究.pdf

1、分類號(hào)：R77密級(jí)：學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位口專業(yè)學(xué)位團(tuán)。學(xué)校代碼：10062學(xué)號(hào)：2011602612學(xué)科門(mén)類：醫(yī)學(xué)又肄眚斜鼻母碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTATION論文題目：氧化應(yīng)激狀態(tài)下人小梁網(wǎng)細(xì)胞中miRNAl99b5p對(duì)TGF—p2作用機(jī)制的研究TITLE：TheMechanismofmiRNAl99b一5pRegulatingTGFp2inHumanTrabecularMeshworkCellsUnderOxidat

2、iveStress一級(jí)學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科：眼科學(xué)論文作者：封霄指導(dǎo)教師：汪建濤教授導(dǎo)師組成員：蘇暢研究員天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一四年五月天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要目的：青光眼的眼壓增高與小梁網(wǎng)的氧化變性、流出阻力增加有關(guān)。原發(fā)性開(kāi)角型青光眼(PrimaryOpenAngleGlaucoma，POAG)患者中細(xì)胞外基質(zhì)(ExtracellularMatrix，ECM)的異常沉積可導(dǎo)致小梁網(wǎng)流出阻力增加。本實(shí)驗(yàn)主要研究在氧化應(yīng)激

3、狀態(tài)下人眼小梁網(wǎng)細(xì)胞(HumanTrabecularMeshworkCells，HTMC)中細(xì)胞外基質(zhì)的表達(dá)，以及miRNA199b5p對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子p2(TransformingGrowthFactort32，TGFB2)的作用。方法：在人眼小梁網(wǎng)細(xì)胞中，不同濃度過(guò)氧化氫(H202)刺激HTMC后，利用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)活性的變化。300uMH202刺激HTMC15h，real—timePCR和免疫組化分別檢測(cè)細(xì)胞中TGFB2和纖

4、維連接蛋白(Fibronectin，F(xiàn)N)等細(xì)胞外基質(zhì)基因和蛋白的表達(dá)?；蛐酒瑱z測(cè)在氧化應(yīng)激狀態(tài)下miRNA199b5p的表達(dá)，并用realtimePCR驗(yàn)證miRNA199b5p的表達(dá)。參考生物信息學(xué)miRNA199b5p靶定TGF62。miRNA199b5p過(guò)表達(dá)檢測(cè)其對(duì)HTMC功能的影響并檢測(cè)miRNA199b5p對(duì)TGFB2的作用。結(jié)果：在人眼小梁網(wǎng)細(xì)胞中，H202可抑制細(xì)胞生長(zhǎng)活性，H202可以促進(jìn)TGF132和細(xì)胞外基質(zhì)F

5、N的表達(dá)：H202刺激HTMC后，TGFB2表達(dá)在1h、2h、4h、8h、12h、24h較對(duì)照組增加，相對(duì)表達(dá)量分別為104_033，504125，854248，1088225，1183215，1872309，2538518，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PO01)；FN表達(dá)在1h、2h、4h、8h、12h、24h較對(duì)照組增加，相對(duì)表達(dá)量分另0為100O17，2。82030，4。56035，522186，665218，1106757，1710

6、412，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P001)?；蛐酒蛂ealtimePCR檢測(cè)顯示在氧化應(yīng)激狀態(tài)下miRNA199b5p表達(dá)下調(diào)，H202刺激HTMC后，miRNAl99b5p于1h、2h、4h、8h、12h、24h表達(dá)較對(duì)照組下調(diào)，相對(duì)表達(dá)量分另0為1OOO16。050017，O57039，041014，045009，038012，017004，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P001)。在HTMC中過(guò)表達(dá)miRNA199b5p可抑制細(xì)胞的