促紅細胞生成素改善大鼠心肺復蘇后心功能不全機制的研究.pdf

1、背景和目的：
　　 心功能不全是導致心跳驟?；颊邚吞K后死亡的重要原因之一。我們前期研究觀察到促紅細胞生成素（EPO）對大鼠心肺復蘇后的心功能不全有改善作用，但對EPO改善心肺復蘇后心功能不全的途徑和機制尚不明確。為此本實驗通過觀察EPO干預對心肺復蘇后心肌細胞凋亡率和細胞骨架蛋白的變化，探討EPO改善心肺復蘇后心功能不全的機制；通過體外心肌細胞缺氧/復氧損傷模型，觀察EPO和蛋白激酶C（PKC）抑制劑白屈菜紅堿干預后，體外心肌細

2、胞凋亡及黃素蛋白自體熒光強度的變化,探討EPO抗心肌細胞凋亡的機制，為臨床預防和治療復蘇后心功能不全提供實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 第一部分：
　　 取前期心肺復蘇實驗已制作的大鼠心肌石蠟組織塊，分為正常組、CPR組和EPO組，每組8只。行Tunel染色觀察各組心肌細胞凋亡率，SABC免疫組化法觀察微管蛋白、結蛋白和肌動蛋白變化。
　　 第二部分：
　　 將SD大鼠乳鼠心肌細胞建立缺氧/復氧模

3、型（H/R），并隨機分為4組：①正常組；②缺氧/復氧組（缺氧10h，復氧4h）；③ EPO治療組（缺氧/復氧同時，加EPO干預）；④抑制劑組（缺氧/復氧同時，加EPO和PKC抑制劑聯(lián)合干預）。 流式細胞儀Annexin V FITC/PI法檢測各組心肌細胞凋亡率，免疫熒光法觀察各組細胞微管蛋白、肌動蛋白結構和熒光強度變化，共聚焦顯微鏡觀察各組細胞黃素蛋白自體熒光變化，監(jiān)測線粒體ATP敏感性鉀通道（mitoKATP）開放情況。
　　

4、 結果：
　　 第一部分：
　　 1.CPR組心肌細胞凋亡數(shù)（314.1個±30.7個）較正常組（165.2個±45.9個）明顯升高（P＜0.05）。EPO治療組心肌細胞凋亡數(shù)為（242.1個±20.0個），與CPR組比較，凋亡細胞數(shù)明顯減少，其差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　 2.正常組、CPR組、EPO治療組大鼠肌動蛋白免疫組化平均光密度值分別（8.18±1.04、8.51±1.96、6.34±

5、0.43）×10-2，組間兩兩比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；微管蛋白免疫組化平均光密度值分別（8.87±1.85、7.35±0.26、9.70±0.13）×10-2，組間兩兩比較均無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；結蛋白免疫組化平均光密度值分別為（7.57±2.96、8.20±3.17、7.48±1.82）×10-2，組間兩兩比較均無明顯統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　 第二部分：
　　 1.缺氧/復氧組心肌細

6、胞凋亡率較正常組明顯增加{（42.5％±8.0％）對（13.9％±2.0％）}，比較有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。EPO處理降低了缺氧/復氧心肌細胞凋亡率（22.7％±5.0％），與缺氧/復氧組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。蛋白激酶C抑制劑阻斷了EPO抗缺氧/復氧損傷后心肌細胞凋亡作用，其凋亡率（46.7％±17.0％）與EPO治療組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　 2.缺氧/復氧組心肌細胞肌動蛋白、微管蛋

7、白熒光染色結構明顯破壞，網狀結構模糊不清，平均熒光強度值{（0.43±0.15）×10-2、（0.36±0.10）×10-2}較正常組{（5.0±1.6）×10-2、（8.2±3.6）×10-2}明顯減弱，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），但與EPO治療組{（1.8±0.20）×10-2、（1.7±0.36）×10-2}比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　 3.EPO治療組心肌細胞黃素蛋白自體熒光強度（2.20±0

8、.11）×10-2較正常組、缺氧/復氧組、抑制劑組{（0.15±0.05）×10-2、（0.28±0.17）×10-2、（0.99±0.33）×10-2}均明顯增強，分別比較差異均有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　 結論：
　　 1.減少心肌細胞凋亡是EPO改善窒息誘導大鼠心肺復蘇后心功能不全的重要機制之一。
　　 2.EPO抗凋亡機制可能是通過磷酸化PKC,繼而開放mitoKATP通道而起作用。