同種大白兔頸動脈移植后血管形態(tài)及腫瘤壞死因子變化的意義.pdf

1、血管缺損是臨床工作中常遇到的問題之一，由于優(yōu)質(zhì)的人造大血管的發(fā)展，在臨床上已經(jīng)取得了很好的效果。但是小血管的應(yīng)用令人失望，目前小血管的修復(fù)主要是用自體血管。血管移植物已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于血管的重建和修復(fù)。但是在臨床實(shí)際應(yīng)用過程中，由于自體血管來源的限制，使一些病人不能得到及時的治療。如果能及時提供具有活性的同種異體血管作為替代物，就會使許多患者得到更有效的治療。而同種異體血管移植后由于缺血再灌注損傷和免疫排斥反應(yīng)等原因影響了移植血管的成功率

2、。腫瘤壞死因子是一種自分泌的促炎癥細(xì)胞因子，在缺血再灌注損傷和同種移植排斥反應(yīng)可導(dǎo)致移植器官組織機(jī)能障礙。 本實(shí)驗通過建立同種大白兔頸動脈移植模型，從病理形態(tài)學(xué)、酶學(xué)活性及基因表達(dá)等方面對移植后血管腫瘤因子(Tumor necrosis factor TNF)變化的意義進(jìn)行探討，為實(shí)際工作中尋找一種有效的血管處理和保存的方法提供理論依據(jù)。 實(shí)驗材料： 1．實(shí)驗動物雄性成熟日本大白兔，體重1.65-2.5kg，30

3、只；新西蘭大白兔5只，體重2.8-3.2kg。中國醫(yī)科大學(xué)附屬二院動物室提供。 2．主要實(shí)驗儀器及試劑顯微外科手術(shù)放大鏡(Keeler 2.5倍)、SSW-3型顯微外科手術(shù)器械、深低溫冷凍冰箱(-86C FORMA-725)、Citadel2000型脫水機(jī)/Thermo全自動切片機(jī)(SHANDON Co．)、低溫高速離心機(jī)(HERMLE Z383K Co．)、PTC-100PCR擴(kuò)增儀、KODAK ID型凝膠成像系統(tǒng)分析儀、S-

4、500P型紫外線可見光連續(xù)分光光度儀(法國SECOMAM公司)、總RNA提取及cDNA合成試劑盒(日本TaKaRa生物技術(shù)有限公司)、TNF引物(北京奧科生物工程公司)、TNF免疫組織化學(xué)試劑盒(北京中山生物工程公司)、RPMI 1640營養(yǎng)液(美國Gibco BRL公司)、DMSO(德國Merck公司)、青霉素鈉(PC，400萬單位)、硫酸鏈霉素(SM，100萬單位)。 實(shí)驗方法： 動物模型按人類無菌手術(shù)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行各種試

5、劑配制及自體/異體頸動脈移植手術(shù)。其中，A組采用自體血管原位植入。B組采用新鮮采集的血管肝素鹽水(HNS，25 IU/ml)沖洗后立即植入受者頸動脈。C組采用PC/SM(50 IU/ml)處理后室溫密閉保存(72小時內(nèi)使用)的異體血管植入。D組植入PC/SM(50 IU/ml)處理后液氮保存的血管。術(shù)后觀察1-4周。取材時記錄移植動脈周圍情況及動脈外觀、直徑、是否通暢、有無狹窄。采集受者植入血管等標(biāo)本分別保存于EDTA-2Na/抑肽酶塑

6、料管和液氮中備檢。 檢測指標(biāo)和方法用HE染色法觀察移植血管病理學(xué)改變；用免疫組化方法觀察移植血管和心肌的TNF變化；用RT-PCR方法檢測移植血管TNF的變化。 統(tǒng)計學(xué)分析數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS軟件進(jìn)行檢驗，p<0.05認(rèn)為有顯著差異。 結(jié)果： 1，移植血管形態(tài)學(xué)改變：各組移植段血管均有不同程度的炎癥或損傷性反應(yīng)。B組血管損傷最為明顯，幾乎囊括了其它各組血管損傷的各種表現(xiàn)，且出現(xiàn)血管壞死、結(jié)構(gòu)破壞，血管腔內(nèi)大量

7、機(jī)化血栓侵蝕血管壁、外膜水腫增厚以及外膜大量炎性細(xì)胞浸潤、血管中膜增厚明顯等。D組血管結(jié)構(gòu)保持較好，但也出現(xiàn)了血栓形成、腔內(nèi)血栓機(jī)化溶解。各個亞組的情況類似。 2，血管移植后通常情況：血管移植后開放近端血管遠(yuǎn)端血管充盈為血管通暢標(biāo)準(zhǔn)，即時通暢率為100％.取材時先剪斷遠(yuǎn)端移植血管，以有血液流出為通暢標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果A組通暢率100％(3/3)，B組44.4％(4/9)，C組55.6％(5/9)，而D組77.8％(7/9)。 3

8、.從各組血管組織切片中表達(dá)情況和統(tǒng)計結(jié)果可以看出，A組和D組TNF表達(dá)率明顯低于B組和C組，B組為最高，與其它各組比較P<0.05。 4.心肌組織切片結(jié)果與血管移植組有類似的結(jié)果：B組心肌的TNF的表達(dá)高于其他組，與A、D組比較P<0.05，而與C組無顯著差異性。 5．B組TNF -α基因水平(mRNA)的表達(dá)較A組明顯增強(qiáng)(P<0.05。其他各組與A和組間比較，無顯著性差異。 結(jié)論： 1．同種動脈血管移

9、植后血管損傷在病理學(xué)上表現(xiàn)為血管壁以LC為主的炎性細(xì)胞浸潤、血管內(nèi)膜增生、中膜增厚。嚴(yán)重者出現(xiàn)血管壁纖維素樣壞死和血管結(jié)構(gòu)破壞，甚至有血栓形成。 2．經(jīng)抗生素處理常溫下保存的同種血管植入后，血管功能和結(jié)構(gòu)難以維持，病理學(xué)表現(xiàn)并不優(yōu)于未經(jīng)處理而直接植人的同種血管。 3．經(jīng)抗生素處理并在液氮中保存的同種血管植入后效果最佳。其臨床效果與自體血管移植相近。 4．血再灌注損傷和/或免疫排斥反應(yīng)能激發(fā)移植血管和全身各組織器官